還原糖用三苯基四唑化氯的試驗(yàn)法
還原糖和三苯基四唑化氯的無(wú)色堿性溶液共熱,將有三苯基甲?沉淀出來(lái):
這個(gè)反應(yīng)曾作為糖類(lèi)的一個(gè)極端靈敏試驗(yàn)法的基礎(chǔ)。這法與還原糖的大多數(shù)其它試驗(yàn)法不同,醛類(lèi)對(duì)它沒(méi)有干擾。此外,其它還原劑,如肼、胲、亞硫酸鹽、酒石酸、檸檬酸等,對(duì)這個(gè)試劑都完全沒(méi)有活性??箟难?,根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)可視同還原糖,也會(huì)發(fā)生同樣的反應(yīng)。
操作手續(xù) 試液一滴與0.5%三苯基四唑化氯的水溶液兩滴及0.5N氫氧化鈉一滴在微量試管或微量坩堝內(nèi)混和?;旌衔镏蠓?-2分鐘,視還原糖的含量,有紅色或沉淀出現(xiàn)。
鑒定限度:0.2微克 葡萄糖、果糖、乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、抗壞血酸。
還原糖的試驗(yàn)法
幾乎一切還原糖的常量試驗(yàn)法都可用于點(diǎn)滴試驗(yàn)。這些試驗(yàn)法(間-苯二胺法除外)都有賴(lài)于還原性質(zhì),因而其它還原性的物質(zhì)必不可存在。
許多還原糖試驗(yàn)法的鑒定限度(液滴的體積為0.04毫升)列于表33。
表33 還原糖類(lèi)
試劑 | 顏色變化 | 鑒定限度/微克 |
納藍(lán)德氏(Nylander's)溶液(含酒石酸鹽的堿性鉍溶液) | 變黑 | 10 |
AgNO3的氨溶液 | 變黑 | 0.1 |
次碘酸鎂〔Mg(OH)2與KI3〕 | 褪色 | 5 |
0.001%堿性亞甲藍(lán)的堿性溶液 | 褪色 | 1 |
1,3,4-二硝基乙酰替苯胺的堿性溶液 | 紫色 | 2 |
鹽酸-間-苯二胺(用試液一滴蒸發(fā)) | 黃-綠色螢光 | 0.5 |
通過(guò)氧化銀的還原來(lái)檢定還原糖的方法,也可作為靈敏的斑點(diǎn)反應(yīng)在紙上來(lái)進(jìn)行。濾紙條浸滲于0.2N硝酸銀溶液,并使干燥。將堿性試液的單滴,及大致同樣濃度氫氧化鈉溶液的單滴,各別彼此挨著置于紙上,就有兩個(gè)氧化銀的棕色斑點(diǎn)現(xiàn)出。約1分鐘后,將紙放入氨水中,其未變化的氧化銀在數(shù)分鐘內(nèi)完全溶解,而細(xì)小分散的不溶解銀的黑色斑點(diǎn),則遺留在由含還原糖試樣所產(chǎn)生的斑點(diǎn)上。
鑒定限度:0.1微克 葡萄糖
這個(gè)試驗(yàn)法不能應(yīng)用于有含CS或SH基團(tuán)有機(jī)化合物存在的場(chǎng)合。在規(guī)定的條件下,這些化合物會(huì)形成黑色的Ag2S,同樣不溶于氨。
己酮醣用氯化亞錫、硫酸及脲的試驗(yàn)法
己酮醣和含氯化亞錫的脲在硫酸中的溶液共熱時(shí),形成藍(lán)色。己醛醣和這試劑僅在延長(zhǎng)加熱后才發(fā)生紅色。這個(gè)反應(yīng)的化學(xué)原理尚未明了。
操作手續(xù) 取糖溶液一滴,置微量坩堝中,用試劑溶液6至20滴處理,并在微焰上加熱一分鐘,然后讓其冷卻。如有己酮醣存在出現(xiàn)藍(lán)色。己醛醣存在所給出的紅色,僅在煮沸較久后出現(xiàn),且其強(qiáng)度較差。
試劑溶液:脲4克及SnCl2 0.2克和40%硫酸10毫升,加熱溶解。
下列的物量,可被檢出:
8微克 左旋糖(藍(lán)色) | 20微克 糊精(紅色) |
15微克 蔗糖(藍(lán)色) | 20微克 淀粉(紅色) |
20微克 葡萄糖(紅色) |
碳水化合物因脫水成糠醛的試驗(yàn)法
碳水化合物(二糖類(lèi)及多糖類(lèi))和強(qiáng)無(wú)機(jī)酸或和草酸共同加熱水解而形成單糖類(lèi):
(C6H10O5)x+XH2O → XC6H12O6
繼續(xù)加熱,單糖類(lèi)(戊糖類(lèi))部分脫水而成為糠醛或類(lèi)似的醛類(lèi),如用己糖時(shí),則成為羥甲基糠醛:
這些醛類(lèi)能隨水蒸汽揮發(fā),并能和苯胺形成紫色產(chǎn)物。
為使碳水化合物水解及其所產(chǎn)生的單糖類(lèi)脫水進(jìn)行得很好,可用糖漿狀磷酸共同加熱。
操作手續(xù) 在一個(gè)微量坩堝中,置試樣一撮或?qū)⒃囈阂坏卧谠撣釄鍍?nèi)蒸發(fā)使干。加入糖漿狀磷酸一滴,再將坩堝蓋以曾用醋酸苯胺溶液潤(rùn)濕過(guò)的濾紙一小片,并用一表面皿壓住。在坩堝底部用微焰小心加熱30~60秒鐘(慎防潑濺)。按照碳水化合物的存在量,將有粉紅至紅色出現(xiàn)。
試劑:10%苯胺在10%醋酸中的溶液。
下列各物量可被檢出:
2.5微克 葡萄糖 | 2.5微克 蔗糖 |
2.5微克 左旋糖 | 2.5微克 乳糖 |
3.0微克 淀粉 | 2.5微克 山梨糖 |
2.5微克 半乳糖 | 2.5微克 麥芽糖 |
5.0微克 瓊脂 | 2.5微克 阿拉伯糖 |
5微克乙基纖維素及甲基纖維素,乙酰纖維素及黃蓍樹(shù)膠,都給出正反應(yīng)。