用四溴酚酞乙酯的試驗(yàn)法
固體或溶解的四溴酚酞乙酯:
是黃色的,但其水溶的堿金屬鹽卻是藍(lán)色的。這些鹽類(lèi)可被稀醋酸分解,同時(shí)再生出酚。這個(gè)酯如和膠態(tài)的朊類(lèi)接觸,則會(huì)現(xiàn)出藍(lán)色。顯然,這是由于形成似鹽吸附化合物的緣故,這種化合物與堿金屬鹽不同,是不會(huì)被稀醋酸分解的。這似與一種被稱(chēng)為指示劑的“朊誤差”(pH指示劑轉(zhuǎn)變范圍的位移)的現(xiàn)象有關(guān)。這個(gè)效應(yīng)很強(qiáng)烈地被四溴酚酞乙酯示出。尤其是它的穩(wěn)定鉀鹽,其藍(lán)色溶液可被稀醋酸轉(zhuǎn)成黃色(游離酯類(lèi)的顔色)。但有朊存在藍(lán)色將持久保留。只有加入濃醋酸或無(wú)機(jī)酸才變成黃色。
這個(gè)反應(yīng)對(duì)于天然朊類(lèi)似具有特效性。朊的分裂產(chǎn)物如氨基酸類(lèi),二肽類(lèi)及三肽類(lèi)或腖類(lèi)都無(wú)反應(yīng)。
生物堿類(lèi)如大量存在,也示出與天然朊類(lèi)相似的性行,這可能是由于膠態(tài)分散生物堿和四溴酚酞乙酯形成吸附化合物的緣故,這些吸附化合物也耐醋酸。
操作手續(xù) 試液一滴與藍(lán)色試劑溶液一滴在一滴試板上混和,然后用0.2N醋酸1~2滴酸化??瞻自囼?yàn),將變成黃色,而含朊類(lèi)試樣的深藍(lán)色仍保持不變。如僅有小量朊存在,其色帶綠。
試劑:0.1%四溴酚酞乙酯鉀鹽的酒精溶液。
下列各物可被檢出:
0.5微克 蛋白朊 | 0.5微克 酪朊 | 0.5微克 鮭精朊 |
0.5微克 血紅朊 | 5微克 麻仁球朊 | 1微克 麩朊 |
0.35微克 血清白朊 | 0.5微克 鯡精朊 |
尿中病理增加的朊含量,可用這個(gè)反應(yīng),在一滴尿中作出檢定。
水解分裂或熱分裂成氨基化合物或亞氨基化合物后的試驗(yàn)法
朊類(lèi)被濃無(wú)機(jī)酸水解產(chǎn)生更簡(jiǎn)單的分裂產(chǎn)物,如多肽類(lèi),氨基酸類(lèi)等。由于色氨酸是幾乎一切朊類(lèi)的組份,它分解而產(chǎn)生吲哚及吲哚衍生物。這些氨基及亞氨基產(chǎn)物,可由和氯化螢光素熔化,或和對(duì)-二甲胺基苯(甲)醛縮合來(lái)作出檢定。后法中氨基可以產(chǎn)生有色希夫氏堿類(lèi)。朊類(lèi)因酸分裂所形成的吲哚堿類(lèi)的縮合作用,顯然在下列用對(duì)-二甲胺基苯(甲)醛的試驗(yàn)法中,為一主要的反應(yīng)。
操作手續(xù) 待試朊類(lèi)的試樣(固體或其溶液)在一微量坩堝中,與對(duì)-二甲胺基苯(甲)醛的飽和冰醋酸溶液數(shù)滴及發(fā)煙鹽酸一滴混和。如有紫色出現(xiàn),即示有朊類(lèi)存在。
下列鑒定限度,曾經(jīng)測(cè)出:
1微克 干腖 | 30微克 蛋白朊 |
20微克 血白朊 | 5微克 酪朊 |
100微克 皮粉 | 60微克 胰酶 |
10微克 麻仁球朊 | 胃朊酶,極不靈敏 |
甲狀腺球朊示出正的白朊反應(yīng),但用純甲狀腺素的反應(yīng)則是負(fù)的。腦垂體制劑給出正反應(yīng)。碳水化合物的混合物中,即使少至1%的白朊(例如麻仁球朊)也可清楚地作出檢定。
干熱也可使朊類(lèi)發(fā)生分裂。產(chǎn)生的吡咯及吡咯衍生物隨燃燒產(chǎn)物一同揮發(fā)。如將它們與曾用5%對(duì)-二甲胺基苯(甲)醛的濃鹽酸(或三氯醋酸)溶液浸滲過(guò)的濾紙接觸,現(xiàn)出紫色。這個(gè)熱分解過(guò)程可在微量坩堝中,或在微量試管中進(jìn)行。鑒定限度為100微克左右的朊類(lèi)。