誤差的來源
比色法和分光光度法誤差主要來自以下三個方面:
1.溶液不遵守光的吸收定律而引起的誤差 朗伯-比爾定律要求被測物質(zhì)的化學(xué)穩(wěn)定性要高,溶液濃度也不可過大。如果濃度過大或顯色條件控制得不好,在測定過程中,被測物質(zhì)逐漸發(fā)生離解、締合,使被測物質(zhì)的組成改變,所得標(biāo)準(zhǔn)曲線不再成直線,因而產(chǎn)生誤差。
其次,吸收定律只是在入射光為較純的單色光情況下才是正確的。然而,純粹的單色光是不容易得到的,實際上應(yīng)用的是一定波長范圍內(nèi)的復(fù)合光,當(dāng)采用復(fù)合光進行測定時也會產(chǎn)生偏離吸收定律的現(xiàn)象,往往使標(biāo)準(zhǔn)曲線上部發(fā)生彎曲,產(chǎn)生誤差。
2.由于操作者主觀因素引起的誤差 由于操作不夠熟練或操作不當(dāng);稀釋或顯色過程的操作不夠嚴(yán)格;被測液與標(biāo)準(zhǔn)液不是同時配制的;目視法對觀察顏色感覺不夠靈敏或長時間觀察同一顏色使視覺疲勞,從而難以分辨同一顏色的不同深度;以及樣品、試劑等的稱量誤差;讀取吸收度或透光度時估計刻度不夠準(zhǔn)確等等,所引起的誤差都屬于主觀誤差。針對主觀誤差產(chǎn)生的原因,應(yīng)努力設(shè)法減少或避免??蓢?yán)格按操作規(guī)程去做,保持科學(xué)的作風(fēng),加強責(zé)任感,這樣可使主觀誤差減少到最小的程度。
3.儀器誤差 凡由于儀器的原因所引起的誤差均屬于儀器誤差,如儀器不夠精密,比色杯的厚度及均勻度不合要求、機械部件靈敏性差、刻度欠準(zhǔn)確、光源不夠穩(wěn)定、光電元件失靈、透過濾光片或單色光器的光其波長范圍太寬、雜散光的影響等,都會引入誤差。為克服由于儀器引起的誤差,要對儀器進行定期校準(zhǔn)和嚴(yán)格要求按正規(guī)操作使用及維護。
比色法和分光光度法測量條件的選擇
1.入射光要選擇與測定液有最大吸收的單色光,且波長范圍要窄,否則被測物質(zhì)將吸收雜散光和非最大吸收波長的光,使正常的光吸收減弱,實際吸收度A相對降低而引起誤差。在用λ最大處的單色光透過溶液時,溶液的吸收度為最大,指針偏移A值的格數(shù)也最多,在這種條件下,既使是較小濃度的被測溶液,也能夠明顯地觀察出偏移的格數(shù)來,故靈敏性較高。
2.控制準(zhǔn)確的讀數(shù)范圍,讀取A或T值要控制在0.8~0.1或20%~80%范圍內(nèi)才好。
3.選擇適當(dāng)?shù)目瞻?參比)溶液,理想的空白溶液應(yīng)當(dāng)是被測液中除去被測組分以外的不吸收單色光的那些物質(zhì)組成的液體。在具體測定時往往在操作步驟中規(guī)定以某液為空白溶液(如蒸餾水等)。
4.根據(jù)不同的試樣選擇適當(dāng)?shù)娘@色劑,控制好顯色反應(yīng)的條件如顯色劑用量、溶液酸度、顯色時間及顯色溫度等。