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維生素B1與B6的檢定法


實驗室k / 2018-11-03

維生素B1的檢定法

       這種維生素有各種不同的名稱,如硫胺(素)、抗神經(jīng)炎素、妥魯靈(Torulin),具有如下的結構:

由于它的-NH2基,使它可以進行下列熱解縮合:

2RNH2 → RNHR+NH3

因此,如果維生素B1在硫代巴比土酸共存下和草酸二甲酯一起加熱,就會形成紅色產(chǎn)物,這個反應涉及熱解所產(chǎn)生的氨,作用于草酸二甲酯形成草酰胺。因此,對于熱解產(chǎn)生氨的化合物的檢定法中所述操作手續(xù),可以適用于它的鹽酸鹽。鑒定限度為2.5微克鹽酸維生素B1。
       由于并未見過含一氨基的它種維生素,所以這一根據(jù)草酸二甲酯和硫代巴比土酸存在下的熱解來檢定鹽酸(硝酸)維生素B1的方法,在研究混合維生素方面,就可能具有價値了。
       如有熱解釋出氨的化合物同時存在,這個試驗法就不可使用。
       維生素B1(鹽酸鹽,硝酸鹽)含有的硫,可以加入磷鎢酸使其從稀溶液中沉淀下來。沉淀經(jīng)離心分離后,可以進行硫的檢驗。這法也可用于檢定混合維生素中的維生素B1鹽。

維生素B6的檢定法
       很多種自由對位的酚類可和2,6-二氯苯醌-4-氯亞胺縮合,形成有色的靛酚類,這些都是酸-堿指示劑。維生素B6(鹽酸吡哆醇)含有一個酚型-OH基與一個自由對位,其反應如下:

這一棕-黃色縮合產(chǎn)物暴露于氨時,由于形成一種不穩(wěn)定的酚銨,顏色變藍。
       操作手續(xù)    濾紙溶浸于2,6-二氯苯醌-4-氯亞胺的飽和苯溶液,并在空氣中干燥。小量固體試樣抹在試紙上,或放上水溶液一滴,就有棕-黃色斑點出現(xiàn),在用氨熏蒸后轉(zhuǎn)成深藍色。藍色迅速減褪(酚銨失去了氨),但重新暴露于氨,色即恢復。
       鑒定限度:0.5微克  維生素B6
       因酚類和2,6-二氯苯醌-4-氯亞胺有反應,各種還原性維生素會使試劑還原而耗掉,這個試驗不能直接應用于有酚類或本身為還原劑的各種維生素(維生素B1、B2和C)存在時。在這些情況下,應在微量離心管中,將試液一滴用磷鉬酸的飽和水溶液1~2滴處理,使維生素B6(一種吡啶衍生物)沉淀成磷鉬酸鹽。任何存在的還原性化合物將被氧化而形成水溶的鉬藍,而不能氧化的酚類和酚性化合物都留下來未變。離心分離這藍色懸浮液,沉積物用水洗滌一次,再進行離心分離,然后懸浮于1~2滴水中。取懸浮液一滴放試劑紙上,用氨熏蒸。磷鉬酸鹽發(fā)生分解,并將釋出的維生素B6進行靛酚反應。磷鎢酸也可用來沉淀出維生素B6。


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