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 抗生素檢定培養(yǎng)基1號

中文名稱：抗生素檢定培養(yǎng)基1號

中文別名：抗生素檢定培養(yǎng)基1號(高pH),抗生素檢定培養(yǎng)基1號（低pH)

英文名稱：Antibiotic Agar NO.1

產(chǎn)品貨號：HB5194

產(chǎn)品規(guī)格：250g

保質(zhì)期：  三年

質(zhì)檢信息

質(zhì)檢項目        指標值

蛋白胨          5.0

牛肉浸出粉      3.0

磷酸氫二鉀      3.0

瓊脂            20.0

pH值7.9 ± 0.1  25℃

 

產(chǎn)品用途

抗生素檢定培養(yǎng)基1號用作鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素、紅霉素等效價測定。

用法

稱取本品 31.0g,加熱攪拌溶解于 1000ml 純化水中,115℃高壓滅菌 30分鐘,備用。

抗生素檢定培養(yǎng)基微生物質(zhì)控結(jié)果：

抗生素檢定培養(yǎng)基1號（高pH)微生物靈敏度試驗:

按標簽用法制備培養(yǎng)基，接種以下質(zhì)控菌株，放置36±1℃需氧培養(yǎng)14-16小時。

注：回收率計算時，用TSA瓊脂做對照培養(yǎng)基

質(zhì)控菌株	菌株編號	接種量(CFU)	回收率	生長情況	其它特征
枯草芽孢桿菌	CMCC(B)63501	50-100	≥70%	+++	/
短小芽胞桿菌	CMCC(B)63202	50-100	≥70%	+++	/

 

紅霉素微生物檢定法操作及注意事項：

一、紅霉素概述

紅霉素系大環(huán)內(nèi)酯類抑菌性抗生素,但在高濃度時對高度敏感的細菌也有殺菌作用。臨床上主要用于治療支原體肺炎、沙眼衣原體引起的新生兒結(jié)膜炎、嬰兒肺炎、生殖泌尿道感染、軍團菌病、皮膚軟組織感染，空腸彎曲菌腸炎以及梅毒、痤瘡等癥。本品為白色或類白色的結(jié)晶或粉末，在甲醇、乙醇或丙酮中易溶，在水中極微溶解。本品在pH<6時易被破壞。紅霉素制劑腸溶劑為主要劑型，以克服紅霉素對酸的不穩(wěn)定性及降解物對胃腸道的刺激等缺點，此外還有紅霉素眼膏、軟膏及栓劑等。

二、2015版中國藥典效價測定方法及注意事項

(1)培養(yǎng)基:抗生素1號培養(yǎng)基(pH為7.8~8.0)

(2)試驗菌:短小芽孢桿菌(cmCC (B) 63202)

(3)緩沖液:取磷酸氫二-鉀5.59g與磷酸二 氫鉀0.41g,加水使其成1000ml,濾過，在115C溫度下滅菌30min,制成pH值為7.8的磷酸鹽緩沖液。

(4)雙碟的制備:菌層培養(yǎng)基菌懸液的量約為培養(yǎng)基量的2%,加菌懸液量可視抑菌圈大小及清晰程度進行調(diào)整。

(5)制備供試溶液:

A、紅霉素原料藥供試溶液:精密稱取該供試品適量(約相當于紅霉素50mg)，置50m1的量瓶中，加Z醇( 每10mg紅霉素加4ml乙醇)溶解后,用滅菌水制成每1m1中約含1000單位的溶液，再用磷酸緩沖液( pH7.8)制成抗生素濃度范圍為5.0-20. 0單位/m1的高、低劑量溶液，即得。

B、紅霉素腸溶衣片供試溶液:取本品4片，研細，用乙醇適量(紅霉素0. 25g,加乙醇25ml)研磨使溶解,用滅菌水制成每1m1中約含100單位的溶液，再用磷酸鹽緩沖液(pH7. 8)制成抗生素濃度范圍為5.0-20. 0單位/m1的高低劑量溶液，即得。

C、紅霉素軟膏供試溶液:取本品，精密稱取適量(約相當于紅霉素10mg)，置分液漏斗中，加石油醚20ml,緩緩振搖，使基質(zhì)溶解，用磷酸鹽緩沖液(pH為7. 8-8.0)提取4次，每次約25ml,合并提取液，置100m1量瓶中，加磷酸鹽緩沖液(pH為7.8-8.0)至刻度,制成每1m1中約含1000單位的溶液，再用磷酸鹽緩沖液制成抗生素濃度范圍為5.0-20.0單位/m1的高、低劑量溶液，即得。

(6)培養(yǎng)溫度和時間:培養(yǎng)溫度為35- -37C，培養(yǎng)時間為14-16h。

三、測定中的關鍵點、易出現(xiàn)的問題及注意事項

(1)稱量:本品微有引濕性,稱取樣品時除注意準確稱量外,特別是環(huán)境濕度較高時,尚需注意稱量過程中的吸濕問題，以免引入誤差。

(2)供試品制備:檢測中曾發(fā)現(xiàn)因紅霉素溶解不完全，使含量測定結(jié)果低的情況。溶解供試品時，尤其是制劑，因輔料對主藥的包裹吸附等作用，影響紅霉素的溶出,應用超聲處理等使其完全溶解。

(3)培養(yǎng)基:紅霉素含量測定，對培養(yǎng)基的質(zhì)量要求較苛刻。盡量選擇批量生產(chǎn)的質(zhì)量穩(wěn)定性好的培養(yǎng)基進行測定(我公司有成品干粉培養(yǎng)基,檢測效果好，可購買使用)。

(4)緩沖液: USP23版采用pHB.0磷酸鹽緩沖液稀釋樣品,而中國藥典采用pH7.8的磷酸鹽緩沖液,經(jīng)比較二者對效價測定結(jié)果無明顯影響。

(5)雙碟的制備:中國藥典對紅霉素品種雙碟的制備沒有特殊的要求。底層培養(yǎng)基冷卻凝固后，鋪加菌層培養(yǎng)基前，應注意保溫，一般可以將雙碟放置在37C的恒溫箱中，臨加上層培養(yǎng)基時取出。待菌層完全冷卻凝固后,再放置牛津杯(也可用我公司生產(chǎn)的四聯(lián)式牛津杯)，牛津杯穩(wěn)定后 ,開始滴加藥液。

(6)滴加藥液:每組滴加的雙碟數(shù)以不超過5個為宜,以免擴散時間相差過大，造成結(jié)果誤差。

抗生素檢定培養(yǎng)基1號（低pH)

中文名稱：抗生素檢定培養(yǎng)基1號（低pH)

英文名稱：AntibioticAgar No.1

產(chǎn)品貨號：HB5195

產(chǎn)品規(guī)格：250g

保質(zhì)期：三年

質(zhì)檢信息

質(zhì)檢項目        指標值

蛋白胨           5.0

牛肉浸粉         3.0

磷酸氫二鉀       3.0

瓊脂             15.0

pH值6.5-6.6      25℃

 

產(chǎn)品用途

用于磺芐青霉素效價檢定。

檢驗原理

本法是利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴散作用，抑菌圈直徑與抗生素的濃度或活性相關;比較標準品與供試品兩者對接種的試驗菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測定供試品效價的一種方法。

 

用法

稱取本品26g,加熱攪拌溶解于 1000ml 純化水中,116℃高壓滅菌 20 分鐘,備用。

 

抗生素檢定培養(yǎng)基微生物質(zhì)控結(jié)果：

抗生素檢定培養(yǎng)基1號（低pH）微生物靈敏度試驗:

按標簽用法制備培養(yǎng)基，接種以下質(zhì)控菌株，放置36±1℃需氧培養(yǎng)14-16小時。

注：回收率計算時，用TSA瓊脂做對照培養(yǎng)基。

質(zhì)控菌株	菌株編號	接種量(CFU)	回收率	生長情況	其它特征
枯草芽孢桿菌	CMCC(B)63501	50-100	≥70%	+++	/

 

生素檢定培養(yǎng)基I號（低pH）實驗及注意事項：

操作步驟

1、稱取本品26.0g,加熱攪拌溶解于1000ml純化水中，116℃高壓滅20分鐘，備用；

2、菌懸液的制備?？莶菅挎邨U菌(CMCC(B)63501): 取枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于盛有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，在35-37℃培養(yǎng)7日，用革蘭氏染色法涂片鏡檢測，應有美85%上。用滅菌水將芽跑洗下，在65℃加熱30分鐘，備用;

3、取平板分別注入加熱融化的培養(yǎng)基20ml,放置水平臺面上使凝固，作為底層。另取培養(yǎng)基適量培養(yǎng)基,放冷至48-50℃加人規(guī)定的試驗菌懸液適量，搖勻。在平板中分別加入5ml,使在底層上均的攤布，作為菌層，放置在水平臺上冷卻凝固。

4、在平板中放置牛津杯。無菌鑷子夾住HB四連式牛津杯正面的凸點，將其放置在菌層培養(yǎng)基表面上，如圖1，將壓杯板蓋上，壓住牛津杯5秒左右,使4個小杯與培養(yǎng)基表面緊密接觸，防止出現(xiàn)縫隙導致漏液，然后小心拿走壓杯板。如圖2。

微生物試驗

接種以下質(zhì)控菌株，在36土1C培養(yǎng)14-16小時: 

質(zhì)控菌株	菌株編號	接種量(CFU)	生長情況	其它特征
枯草芽孢桿菌	CMCC(B)63501	/	+++	抑菌圈大小18mm-22mm

 

抗生素檢定培養(yǎng)基I號(低pH)質(zhì)控結(jié)果:

注意事項

1、注入培養(yǎng)基總量不大于20ml,否則放置牛津杯后平皿蓋無法蓋緊。

2、菌量濃度適宜,若菌量濃度過小，則菌層生長弱做不出抑菌圈。

3、菌層培養(yǎng)基表面一定要平整,否則會導致牛津杯漏液。

4、hB四連式牛津杯中央有凸點且平衡翼上標有“海博生物”字體的為產(chǎn)品正面。

5、壓杯板已經(jīng)輻照滅菌，可以直接使用;多次使用，可用酒精棉擦拭即可。

6、將平皿轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)箱培養(yǎng)過程中輕拿輕放，避免劇烈震動，不要堆置培養(yǎng)，以免影響實驗效果

 

產(chǎn)品信息
[重量]	250g
[顏色]	白色
危險性類別
[危險性類別]	非危險品