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伊紅美藍瓊脂

中文名稱：伊紅美藍瓊脂(EMB)

英文名稱：Eosin-Methylene Blue Agar

貨號： HB0107

質(zhì)檢信息

質(zhì)檢項目        指標(biāo)值

蛋白胨          10.0g

乳糖              10.0g

磷酸氫二鉀    2.0g

瓊脂              15.0g

伊紅              0.4g

美藍              0.065g

PH值            7.1±0.2

※請放置陰涼干燥處保存

產(chǎn)品用途

伊紅美藍瓊脂用作弱選擇性培養(yǎng)基、用于分離腸道致病菌，特別是大腸桿菌(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))

檢驗原理

蛋白胨作為基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)提供細(xì)菌生長所需的氮源以及其他營養(yǎng)元素；乳糖作為可發(fā)酵的碳源；伊紅和美藍同時作為抑制劑和指示劑，在酸性條件下產(chǎn)生沉淀，形成具黑色中心有金屬光澤或無光澤的菌落。伊紅為酸性染料，美藍為堿性染料，細(xì)菌分解乳糖產(chǎn)酸時，細(xì)菌帶正電荷，可以與帶負(fù)電的酸性染料結(jié)合即染上了伊紅的顏色；如果細(xì)菌因產(chǎn)堿性物質(zhì)較多，帶負(fù)電荷時與帶正電荷的堿性染料美藍結(jié)合而使得菌落呈藍色。細(xì)菌產(chǎn)酸量較大時，染料可析出結(jié)晶形成金屬光澤。磷酸氫二鉀維持緩沖體系；瓊脂作為凝固劑。  

用法

稱取本品 3.74克，加熱溶解100ml蒸餾水中，121℃高壓滅菌15分鐘，備用。

質(zhì)量控制和典型特征

在36±1℃培養(yǎng)24±2h,典型大腸桿菌菌落特征為具黑色中心有金屬光澤或無光澤。

不同細(xì)菌在伊紅美藍瓊脂上的生長特征

伊紅美藍瓊脂(EMB)微生物靈敏度試驗

按標(biāo)簽用法制備培養(yǎng)基，接種以下質(zhì)控菌株，放置36±1℃需氧培養(yǎng)18-24小時

質(zhì)控菌株	菌株編號	接種量(CFU)	參比或計數(shù)培養(yǎng)基	方法	質(zhì)控結(jié)果	其它特征
大腸埃希氏菌	ATCC25922	20-200	TSA	定量	PR≥05	有金屬光澤，黑色菌落
產(chǎn)氣腸桿菌	CMCC(B)45103	20-200	TSA	定量	PR≥05	無光澤，粉紅色菌落
金黃色葡萄球菌	ATCC6538	/	/	半定量	G≤1	/
大腸埃希氏菌	CJICC(B)44102	20-200	TSA	定量	PR≥0.5	有金屬光澤，黑色菌落
大腸埃希氏菌	ATCC8739	20-200	TSA	定量	PR≥0.5	有金屬光澤，黑色菌落
鼠傷寒沙門氏菌	ATCC14028	/	/	定性	/	無色菌落

 

紅美蘭瓊脂(E郵瓊脂)的原理及使用

一、試驗原理

  伊紅美蘭培養(yǎng)基(簡稱EMB medium) 主要用于大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌的分離和鑒別。

  其配方中各主要成分的作用為:蛋白胨提供碳源和氮源;乳糖是大腸菌群發(fā)酵的糖類;磷酸氫二鉀是緩沖劑; 瓊脂是培養(yǎng)基凝固劑;伊紅(Eosin Y)也稱曙紅或四溴熒光素,為酸性染料，美蘭(eosin-methylene blue) ，也叫亞甲藍(C16H18NSS·Cl)，為堿性染料，二者在培養(yǎng)基中均為指示劑。

  當(dāng)大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時，細(xì)菌帶正電,所以染上紅色，再與美蘭結(jié)合而形成紫黑色菌落，并帶有金屬光澤;產(chǎn)氣腸桿菌則呈棕色，很少有金屬光澤。不分解乳糖的細(xì)菌，如沙門]氏菌和志賀氏菌,則為無色或琥珀色半透明菌落;凝固酶陽性葡萄球菌為無色針尖大小的菌落;白色念珠菌則為蛛絲狀或羽毛狀菌落。

  因該培養(yǎng)基抑制作用較弱,不宜用于腸道致病菌的分離。有資料稱往該培養(yǎng)基中加入鹽酸金霉素，可以抑制大部分雜菌，以用于臨床尿、大便、口腔和陰道分泌物，指甲或皮膚屑中白色念珠菌的快速鑒定。還有報道稱，本培養(yǎng)基可用于檢查凝固酶陽性葡萄球菌，其結(jié)果與;凝固酶試驗相一致 。

二、試驗操作方法

  用伊紅美藍培養(yǎng)基鑒定水中大腸桿菌，步驟如下:

  ①制作伊紅美藍培養(yǎng)基，趁熱注入培養(yǎng)皿中，凝成平板，待用。

  ②用高溫滅菌的錐形瓶盛取河水或溝水，按1: 10稀釋。

  ③取0.1毫升稀釋液接種于伊紅美藍培養(yǎng)基上。用平板劃線分離法進行分離。

  ④將劃線后的培養(yǎng)皿倒置37C溫箱中培養(yǎng)18' 24小時。培養(yǎng)基中會出現(xiàn)大腸桿菌菌落，菌落中心呈暗藍黑色，發(fā)金屬

光澤。

  ⑤將菌落接種于斜面培養(yǎng)基上(由營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基制成)。

三、常見問題

  問:GB/T 5750. 12-2006標(biāo)準(zhǔn)中說大腸菌群初發(fā)酵陽性后，“將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍瓊脂平板上”，怎么轉(zhuǎn)種到伊紅美藍瓊脂平板_上啊?是先配好伊紅美藍傾倒在培養(yǎng)皿上,待瓊脂凝固后，劃線接種，還是先吸取1mL的發(fā)酵液注入到培養(yǎng)皿上，再傾倒15-20mL的瓊脂 ,待凝固后倒置培養(yǎng),就像食品中菌落總數(shù)檢測方法那樣呢?

  答:就是先配好伊紅美藍傾倒在培養(yǎng)皿上，待瓊脂凝固后,劃線接種,這樣可以看到典型菌落形態(tài);然后找一些典型或可疑菌落做T下一步驗證實驗就可以了。

  問:那劃線接種所用的工 具是接種環(huán)還是別的東西?以前沒實踐過平板劃線這個實驗，所以不太了解。另外標(biāo)準(zhǔn)上說的菌落總數(shù)培養(yǎng)基是營養(yǎng)瓊脂，用的和正常檢測食品的PCA計數(shù)平板是- -個東西嗎?

  答:接種用的是接種環(huán)。菌落總數(shù)用的營養(yǎng)瓊脂和檢測食品的PCA差不多，但PCA的營養(yǎng)成分還要高一些。

  問:我實驗條件有限，沒有乳糖和伊紅。乳糖能否用蔗糖代替?伊紅能否用紅墨水干了后的東西代替(我看見某網(wǎng)站上說紅墨水用的是伊紅) ?

  答:常用的伊紅美藍乳糖培養(yǎng)基，可用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細(xì)菌。如果有大腸桿菌,因其強烈分解乳糖而產(chǎn)生大量的混合酸,菌體帶時，故菌落被染成深紫色，從菌落表面的反射光中還可以看到金屬光澤。乳糖是一個半乳糖和一個葡萄糖構(gòu)成，蔗糖是一個果糖和一個葡萄糖形成的。所以乳糖是必須的，因為牽涉到細(xì)菌產(chǎn)酸底物的特異性。

  另外你用紅墨水，不怕里面的某些成分把細(xì)菌殺死嗎?并且墨水不一定是伊紅配成的，而且墨水成分也不僅僅是伊紅，如果你自行代替，至少我是不會承認(rèn)你的實驗結(jié)果是有效的，因為你都說不清楚培養(yǎng)基里到底有什么。

  問:培養(yǎng)基里的磷酸鹽是干嘛的?不加可以嗎?

  答:磷酸氫鹽是作為pE緩沖劑添加的，如果培養(yǎng)時間不長的話,不加也無妨。培養(yǎng)時間長的話,大腸桿菌等細(xì)菌分解乳糖產(chǎn)酸導(dǎo)致pH下降，會抑制不耐酸細(xì)菌的生長。

  問:請問在做大腸菌群的檢測過程中，在配制伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基時，乳糖、伊紅和美蘭溶液要滅菌嗎?

  答:需要滅菌。

  問:顯色培養(yǎng)基，個人覺得還是買成品好!現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)自己比較難配，而且試劑店的這種冷門試劑很多都是長時間存放的，難免變質(zhì)，再說個人每次用量太少，買- -盒試劑又貴又用不完。要是有成品的這種培養(yǎng)基就好了!不知道哪里有賣的?能不能給推薦一下?

  答:現(xiàn)在很多生物試劑都有成品，自己根本不用配。就拿EMB培養(yǎng)基來說吧,我們青島海博生物計數(shù)公司就有好幾個產(chǎn)品類型，有干粉、顆粒、甚至還有直接可以拿來用的倒好的無菌平板，都是針對不同用戶需求專門]制作的。

  問:該產(chǎn)品可靠嗎?質(zhì)量怎么保證?

  答:成品培養(yǎng)基出廠前都是經(jīng)過質(zhì)量檢測的。您要不放心也可以再自己做一下。

問:能詳細(xì)介紹一下你們的M3瓊脂平板這款產(chǎn)品嗎?

  答:

[產(chǎn)品名稱]伊紅美藍平板

[規(guī)格]90m

[用途]供作腸道致病菌及大腸菌群的分離培養(yǎng)

[使用步驟]

1、復(fù)溫:取出培養(yǎng)基復(fù)溫至室溫;

2、接種:將需要接種的預(yù)稀釋好的標(biāo)本或菌株用無菌移液管吸取一定量后移至平板，然后慢慢釋放，釋放的同時將移液管作“Z”字形移動，或采用劃線、涂布、其它常用方法接種于培養(yǎng)基皆可;

3、培養(yǎng):將接種好的培養(yǎng)基作好標(biāo)識，置于35土2C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h后取出，觀察結(jié)果。

[預(yù)期結(jié)果]

根據(jù)菌落形態(tài),做出相應(yīng)的處理或報告。據(jù)檢驗?zāi)康牟煌?，挑取無色菌落或挑選引線紅色及有金屬光澤的菌落轉(zhuǎn)種到克氏雙糖或三糖鐵瓊脂進行鑒定。

[注意事項]

1、檢查平板內(nèi)是否干裂或染菌，如上面有菌請勿使用;

2、請在潔凈的環(huán)境下操作,避免雜菌干擾;

3、培養(yǎng)時培養(yǎng)基平板應(yīng)倒置于培養(yǎng)箱中,避免接觸培養(yǎng)箱壁和底部以致培養(yǎng)基過熱干縮;

4、拆封后未使用完的培養(yǎng)基要及時放到冰箱冷藏儲存，避免干裂;

5、在冰箱儲存很久的培養(yǎng)基容易出現(xiàn)- -些冷凝水,請在潔凈的環(huán)境下將水倒出，然后在培養(yǎng)箱放置一-段時間， 待其

表面干燥后再接種;

6、棄物處理:使用后應(yīng)高壓滅菌或焚燒后方可按一般垃圾處理,也可按專業(yè)技術(shù)人員指示方法處理。

[貯藏] 2~8C,避光儲存,拆封后及時放入冰箱冷藏

[有效期] 3個月

[生產(chǎn)日期及批號]見標(biāo)簽或外包裝

  問:這個方便多了，反正用的量也不是太多的!再問一個問題,為什么要把水樣和融化的培養(yǎng)基混合?不會使菌落數(shù)偏少嗎?

  答:待測液是應(yīng)該和培養(yǎng)基混合，俗稱混平板法。當(dāng)然，你選擇涂平板也沒有問題?；炱桨宸〞⑺啦荒蜔岬募?xì)菌,平板法會對細(xì)菌造成機械損傷，各有利弊。

     個人經(jīng)驗是一個9cm平板倒入培養(yǎng)基后吹干表面的水，加入500u1水樣反復(fù)傾斜平板使得水樣涂遍培養(yǎng)基,然后吹干即可。

 

 

產(chǎn)品信息
[重量]	250g
[顏色]	白色
危險性類別
[危險性類別]	非危險品