SCDLP培養(yǎng)基原理及現(xiàn)象
一、用途及原理
此培養(yǎng)基主要用化妝品檢驗時的樣品制備,前增菌培養(yǎng)。
酪蛋白胨、大豆胨提供細菌生長所需的碳源、碳源及維生素,少量的葡萄糖可提供碳源促進細菌的快速生長,磷酸氫二鉀為緩沖劑,可緩沖細菌分解葡萄糖產(chǎn)生的酸,維持p的相對穩(wěn)定,氯化鈉維持滲透壓,卵磷脂和吐溫80為中和劑,可中和化妝品中添加的防腐劑的抑菌效果,同時吐溫80為表面活性劑,可幫助乳化化妝品中的油性成分在培養(yǎng)基中溶解均勻。
二、培養(yǎng)基配方(g/L)
酪蛋白胨 |
17.0 |
大豆胨 |
3.0 |
葡萄糖 |
2.5 |
磷酸氫二鉀 |
2.5 |
氯化鈉 |
5.0 |
卵磷脂 |
1.0 |
吐溫 |
7.0 |
PH |
7.2士0.1 |
三、配制方法
稱取本品31. 0g,另取吐溫-80 7. 0g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝, 121C高壓滅菌15 分鐘。備用。
配制說明:培養(yǎng)基中的卵磷脂不溶于水,因此冷水溶解后的培養(yǎng)基呈渾濁狀態(tài),加入吐溫80加熱溶解后可使卵磷脂溶解均勻,但吐溫80在溫度較高的條件下也呈渾濁狀態(tài),因此剛滅菌結束的培養(yǎng)基也呈渾濁狀態(tài),冷卻后培養(yǎng)基會逐漸變澄清。
四、生長現(xiàn)象及結果觀察
接種以下質控菌株,在36士1C下培養(yǎng)18- -24小時:
質控菌株 |
菌株編號 |
接種量/CFU |
生長現(xiàn)象 |
鼠傷寒沙門氏菌 |
ATCC14028 |
10-100 |
渾濁 |
金黃色葡萄球菌 |
ATCC6538 |
10-100 |
渾濁 |
大腸埃希氏菌 |
AT0C25922 |
10-100 |
渾濁 |
銅綠假單胞菌 |
ATCC27853 |
10-100 |
渾濁 |
生產(chǎn)方法(同行參考配制)
1.準備溶液
在容器中加入一部分所需量的水,按照培養(yǎng)基的配方稱取各種原料,依次加入使其溶解,后補足所需的水。蛋白胨、肉醬等物質需要加熱溶解,加熱時蒸發(fā)的水分在所有原料溶解后再加水。
準備固體培養(yǎng)基時,先將準備好的SCDLP液體培養(yǎng)基煮沸,然后加入稱好的瓊脂,繼續(xù)加熱至完全融化。繼續(xù)攪拌,避免燒壞瓊脂糊底部。
2.調(diào)節(jié)酸堿度
用pH試紙(或pH電位計或氫離子濃度比色計)測試培養(yǎng)基的pH值。如果不符合要求,可以用10%鹽酸或10%氫氧化鈉調(diào)節(jié),直到配方要求的酸堿度調(diào)節(jié)完。
3.過濾
趁熱用濾紙、紗布或棉花過濾準備好的培養(yǎng)基。用紗布過濾時,好折疊成六層。用濾紙過濾時,可將濾紙折疊成瓦棱柱狀,鋪在漏斗上過濾。
4.包裝
過濾后的SCDLP液體培養(yǎng)基應分開包裝。如果要制作傾斜培養(yǎng)基,需要將培養(yǎng)基分成試管。如果要制作平板培養(yǎng)基或液體或半固體培養(yǎng)基,培養(yǎng)基應裝在錐形瓶中。
包裝時,一只手松開彈簧夾,使培養(yǎng)基流出,另一只手握住幾個試管或錐形瓶,依次拿起培養(yǎng)基。包裝時注意不要使培養(yǎng)基粘附在管口或瓶口,以免浸泡棉條造成雜菌污染。
裝入試管的培養(yǎng)基量取決于試管和錐形瓶的大小和需要。一般制作斜面培養(yǎng)基時,每根15150 mm試管裝3 ~ 4 ml左右(1/4 ~ 1/3管高),如果制作深層培養(yǎng)基,每根20220 mm試管裝12 ~ 15 ml左右。每個錐形瓶中填充的介質通常是其體積的一半。
5.添加棉塞
分裝后,需要用棉塞塞住管口或瓶口。棉塞的主要用途是過濾空氣,避免污染。棉塞應使用普通的新鮮干棉,不能使用脫脂棉,以免脫脂棉吸水而不使用棉塞。
制作棉塞時,根據(jù)棉塞的大小將棉花鋪成合適的厚度,抓一片手掌,鋪在左手拇指和食指形成的圓孔中,右手食指插入棉塞中間,同時左手食指和拇指稍握,就會形成一個長條狀的棉塞。
棉塞制作完成后,應迅速插入管口或瓶口,棉塞應緊貼內(nèi)壁,不留縫隙,防止空氣中的微生物沿褶皺侵入。棉塞不應太緊或太松。衛(wèi)生棉條堵塞后,便攜式衛(wèi)生棉條、管子和瓶子不要掉落是合適的。棉塞的三分之二應該在管子或瓶子里,上端露出一點棉花便于拔出。試管和塞有棉塞的圓錐形瓶子應蓋上厚紙,用繩子捆綁消毒。
6.制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基滅菌后,如斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基,應在培養(yǎng)基固化前進行。
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