1.顯色劑的選擇及用量
所選用的顯色劑與被測物質(zhì)生成的有色化合物的顏色要深,克分子消化系數(shù)要大,其它共存物質(zhì)干擾??;生成的有色化合物的組成要恒定,離解度要小,化學(xué)性質(zhì)要穩(wěn)定;顯色劑本身最好是無色或色極淡,至少要求與反應(yīng)生成物的顏色的色調(diào)上有顯著差異。
所加入顯色劑的量,要足夠與被測物質(zhì)完全反應(yīng)的量,所以在一般情況下,加入顯色劑的量應(yīng)是過量的且要固定量。特別在制備標(biāo)準(zhǔn)管和樣品管時(shí),各管加入顯色劑的量應(yīng)該完全相同。
2.顯色反應(yīng)條件
要嚴(yán)格控制顯色反應(yīng)條件,如時(shí)間、溫度、顯色劑的濃度、溶液的pH等。以保證在測定過程中溶液的消光值符合朗伯-比爾定律。減少實(shí)驗(yàn)誤差,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度。
3.溶液的顏色
被測溶液的顏色不要太深或者過淺,對消光值的范圍應(yīng)在0.02~1.0之間(即對光的吸收率在90~5%)。如果讀數(shù)在0.1~0.6之間時(shí),光密度的測量具有最高的準(zhǔn)確度。
4.溶液顏色的穩(wěn)定時(shí)間
要求溶液的顏色應(yīng)該能穩(wěn)定一定時(shí)間,可以較從容地進(jìn)行比色測定。因?yàn)楦鞣N顏色反應(yīng)在加全試劑后顯色時(shí)間和穩(wěn)定時(shí)間不同;或者由于其它原因在顯色后一定時(shí)間以后要逐漸褪色。針對這些情況,可以作一條溶液的光密度與放置時(shí)間的關(guān)系曲線。根據(jù)曲線選擇顏色達(dá)到最深(光密度最大)而且穩(wěn)定的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行比色。
(1)儀器應(yīng)放置在固定而且不受震動(dòng)的工作臺上,室內(nèi)要求與天平室的條件一樣嚴(yán)格,所以往往安放在天平室內(nèi)。
(2)儀器不要受強(qiáng)光照射,而且防止灰塵和潮氣進(jìn)入,不使用時(shí)要加防光罩或套蓋。干燥劑要經(jīng)常更換。保持儀器和臺上清潔。
(3)在接電源前要注意檢查開關(guān)、粗細(xì)調(diào)節(jié)器、光路閘門是否都到0或關(guān)閉狀態(tài)。
(4)電源電壓和儀器所用電壓要相符合,并接地線。
(5)比色槽皿要保持清潔干燥,連續(xù)使用時(shí),每次都要蒸餾水沖洗干凈,槽外面水珠要用綢布或擦鏡紙擦干。不要用手拿透光玻璃面。
(6)濾光片要保持清潔,擦?xí)r亦用綢布或擦鏡紙。用手指拿時(shí),要拿塑料框。
(7)儀器連續(xù)使用時(shí)間不要過長,光電比色計(jì)不要超過4小時(shí),分光光度計(jì)不要超過2小時(shí),要間歇半小時(shí)以上オ能再用。不允許使儀器處于工作狀態(tài)工作人員離開崗位。要隨用隨開,避免光電池疲勞失效,硒光電池衰老失效后要及時(shí)更換新的。
(8)光電比色計(jì)的開關(guān)從0或1撥到2以前,需插上任一濾光片(最好儀器總是插有一塊濾光片),避免光電池過度曝光縮短壽命。分光光度計(jì)則隨時(shí)將光路閘門扳到黑點(diǎn),關(guān)閉好遮蓋光路的閘門,保護(hù)光電池。
(9)用完儀器,要將所有開關(guān)、旋鈕、調(diào)節(jié)器撥回零位或關(guān)閉。特別要防止儀器震動(dòng),搬動(dòng)時(shí)要小心,保護(hù)檢流計(jì)(使檢流計(jì)的開關(guān)撥到0上)。