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薄層層析法的原理、吸附劑與展開劑選擇


實(shí)驗(yàn)室k / 2019-07-16

       原理

       薄層層析法是一種具有設(shè)備簡(jiǎn)單、操作容易、快速，并具有能用腐蝕性顯色劑、加熱穩(wěn)定、靈敏度高，分離效果好等優(yōu)點(diǎn)。也能和其它分析儀器聯(lián)合使用，提高分析效果。如雙光束薄層層析儀就是薄層層析和光密度計(jì)結(jié)合起來的一種儀器。是目前分析方法中廣泛使用的方法之一，特別在藥物、衛(wèi)生監(jiān)測(cè)、環(huán)境保護(hù)等方面使用較多。

       薄層層析是把吸附劑或擔(dān)體均勻地鋪在一塊玻璃板或塑料板上，鋪成0.25～1毫米薄薄的一層，各組分在此薄層上進(jìn)行層析分離，因此稱薄層層析法。已鋪好的薄層板簡(jiǎn)稱薄板。將被分離的樣品溶液點(diǎn)在薄板的一端，選用合適的展開劑進(jìn)行展開。其原理和柱層析完全相同。吸附薄層原理也是通過吸附劑對(duì)組分不斷地吸附與解吸，分配薄層也是由于組分在兩相中分配系數(shù)不同達(dá)到分離。因此有人稱薄層層析為散開的柱層析。薄層層析可做為柱層析選擇層析條件的預(yù)備方法。
       薄層層析按分離機(jī)制除了吸附和分配外尚有離子交換薄層和凝膠過濾薄層。這里主要介紹吸附薄層層析法。
       吸附劑的選擇
       薄層層析中使用的吸附劑與柱層析一樣。常用氧化鋁及硅膠。在薄層層析中用的吸附劑顆粒要比柱層析的更小，吸附劑的顆粒大小對(duì)分離效能，展開速度以及Rf值都有很大關(guān)系。顆粒太大使展開劑展開速度太快，分離效果不好顆粒太小，展開速度又太慢，往往產(chǎn)生拖尾。一般要求粒度為150～200目，顆粒大小要均勻，如不均勻則制成的薄板不均勻，影響分離效果。
       展開劑的選擇
       薄層層析中展開劑的選擇和柱層析中選擇流動(dòng)相相同。極性大的組分應(yīng)選用極性大的展開劑，如果被測(cè)組分展開距離太大甚至接近前沿，則應(yīng)降低展開劑的極性，如果被測(cè)組分的Rf值太小，甚至停留在原點(diǎn)，則應(yīng)適當(dāng)增大展開劑極性。一般是先用單一溶劑進(jìn)行展開試驗(yàn)，如用氯仿做展開劑時(shí)被測(cè)組分的Rf值太小或Rf值為0(在原點(diǎn)不動(dòng))，這時(shí)可適當(dāng)加一定比例極性較大的展開劑進(jìn)行試驗(yàn)，或者用多種溶劑按一定比例混合進(jìn)行試驗(yàn)，直到能達(dá)到分離為止。在薄層分離中各斑點(diǎn)的Rf值要求在0.3～0.8之間，Rf值之間應(yīng)相差0.05以上，否則易造成斑點(diǎn)重迭。
       如果做堿性物質(zhì)分離時(shí)，在展開劑中可適當(dāng)加入堿性溶劑，如二乙胺、氨水或吡啶等。如分離酸性物質(zhì)時(shí)，可在展開劑中適當(dāng)加入酸性溶劑如乙酸、甲酸等。

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