梯度洗脫
抖化學(xué) / 2022-10-22
梯度洗脫LSC中經(jīng)常遇到的是多組分樣品，其中同時(shí)包含有弱吸附物質(zhì)(低的K'值)和強(qiáng)吸附物質(zhì)(高的K'值)。沒(méi)有一個(gè)等強(qiáng)度的混合物能夠在合理的時(shí)間內(nèi)，或以可測(cè)定的濃度洗脫全部組分，而又同時(shí)具有良好的分辨率。這種共同的情況稱(chēng)為“洗脫色譜的普遍問(wèn)題(GEP)”[13]。為了適當(dāng)?shù)靥幚磉@類(lèi)樣品，必須在色譜展開(kāi)期間改變譜帶的遷移速度。程序變?nèi)軇?梯度洗脫)是解決GEP最常用的技術(shù)。
程序變?nèi)軇┥婕暗皆谏V展開(kāi)期間流動(dòng)相強(qiáng)度的變化(即dδ°/dt )。通常是在分離過(guò)程中增加δ°值。變化可以分階或連續(xù)地進(jìn)行。在HP-LC中不常采用階式變化，因?yàn)?delta;°值變化太劇烈時(shí)，可能發(fā)生溶質(zhì)頂替作用。實(shí)際上，強(qiáng)得多的溶劑前沿經(jīng)過(guò)柱子時(shí)把溶質(zhì)“攜帶”在一起(即在此新的溶劑中K'≈0 ),它們流出時(shí)是未分開(kāi)的或分辨很差的譜帶。如果其變化(δ°2~δ°1)較小，則溶質(zhì)頂替的可能性就減少。Scott 和Kucera[19]提出，為了包括0≤δ°≤0.85這一范圍，至少需要12種純?nèi)軇?/span>
實(shí)驗(yàn)上更方便的是調(diào)節(jié)一個(gè)或多個(gè)二元混合物的組成，而不是使用純?nèi)軇﹣?lái)產(chǎn)生變?nèi)軇┏绦?。大多?shù)現(xiàn)代液相色譜儀都設(shè)計(jì)成便于使用兩種溶劑梯度。如前所述，選擇兩種δ°值各不相同的溶劑并將其混合，就可以得到處于二者之間的任何δ°值。根據(jù)圖5-6可知,兩種溶劑的8°值相距越遠(yuǎn)，溶劑的強(qiáng)度-組成曲線的初始部分就越陡峭。Snyderi24) 曾發(fā)現(xiàn)de9/dt的線性變化對(duì)于LSC是有利的，這是因?yàn)? (1)諸峰間隔相等，得到單位時(shí)間內(nèi)的最大分離度; (2)近似于相等的譜帶寬度，可利用檢測(cè)器的最大靈敏度; (3)沒(méi)有由于壓縮了峰形拖尾而出現(xiàn)譜帶分裂，(4)對(duì)已經(jīng)測(cè)量或估算了K'值的溶質(zhì)則可計(jì)算其保留體積。當(dāng)在程序變溶劑中使用二元溶劑混合物時(shí)，可利用凹形梯度輪廓來(lái)實(shí)現(xiàn)dδ°/dt的線性變化。圖5-8描述了甾體類(lèi)在薄殼硅膠柱上進(jìn)行的程序變?nèi)軇┑姆蛛x。
.jpg "溶劑程序分離")
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