紫外分光光度計(jì)的性能檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)室k / 2019-08-07
一、目的
本實(shí)驗(yàn)使學(xué)生初步掌握紫外分光光度計(jì)部分性能的鑒定方法及儀器的使用方法。
二、提要
分光光度計(jì)性能的好壞，直接影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確程度。各國(guó)藥典中所采用的分光光度法大致分兩類(lèi)：一以美國(guó)藥典為代表，不給出純品的吸收系數(shù)，但需備有標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定時(shí)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)操作，以抵消儀器的誤差；另一以英國(guó)藥典為代表，項(xiàng)目中給出純品的吸放系數(shù)，定量時(shí)與已知的吸收系數(shù)相比較即可，但對(duì)儀器的性能要求甚高。我國(guó)目前采用英國(guó)藥典常用法。
三、方法
1.吸收池的配對(duì)性 石英制的吸收池對(duì)紫外線(xiàn)亦稍有吸收，1cm的吸收池在220~280nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)，以空氣為100％，其透光率往往小于100％，且每個(gè)吸收池吸收多少也不完全相同，在每次測(cè)定前應(yīng)做吸收池的配對(duì)檢驗(yàn)。
檢驗(yàn)方法同比色法中比色皿的檢驗(yàn)。
2.波長(zhǎng)精度和重現(xiàn)性 用氫燈校正379～656nm一段譜帶中的幾個(gè)譜線(xiàn)，229～268nm一段譜線(xiàn)可用苯的吸收峰校正。
先以486.13nm氫燈譜線(xiàn)來(lái)校正儀器。將選擇開(kāi)關(guān)轉(zhuǎn)至×0.1，透過(guò)率讀數(shù)放在100(或?qū)⑦x擇開(kāi)關(guān)轉(zhuǎn)至×1透過(guò)率讀數(shù)放在10)，關(guān)小狹縫打開(kāi)光門(mén)，緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)旋鈕尋找氫燈486.13nm峰出現(xiàn)的位置，然后按下列氫燈譜線(xiàn)測(cè)試656.28、581.21、486.13、434.05、379.79nm。
在短波段，因氫燈無(wú)分裂的譜線(xiàn)，可用苯的吸收峰校正波長(zhǎng)。在25ml容量瓶?jī)?nèi)，滴入一滴苯(A.R.)，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻后，以無(wú)水乙醇為空白，在225～270nm間用1cm石英池測(cè)定吸收度，苯在無(wú)水乙醇中的吸收峰如下：
229.2 233.9 238.9 243.3
248.5 254.5 260.6 268.4
在吸收峰附近每隔0.1nm測(cè)一讀數(shù)。
此外也可用鏷釹玻璃檢查波長(zhǎng)精度，751型及CΦ-16型均備有鐠釹玻璃濾光片。
對(duì)波長(zhǎng)精度和重現(xiàn)性的要求如下表(汞燈譜線(xiàn))。
汞燈譜線(xiàn)的波長(zhǎng)與精度及重現(xiàn)性的要求
| 波長(zhǎng)(nm) |
精度(nm) |
重現(xiàn)性(nm) |
|
230.21
237.83
253.65
275.28
296.73
312.57
365.02
404.66
|
±3.0
±3.0
±3.0
±3.5
±3.5
±0.45
±0.60
±0.70
|
±0.15
±0.15
±0.15
±0.20
±0.20
±0.30
±0.30
±0.35
|
注：如用氫燈測(cè)定時(shí)，可參考近似的汞燈波長(zhǎng)以確定精度與重現(xiàn)性的要求。
3.分辨率 用汞燈，狹縫寬度為0.02mm時(shí)，汞的365.02、365.48及366.33nm三條譜線(xiàn)應(yīng)能分清，在儀器上有明顯反應(yīng)。
4.吸收值精度和儀器線(xiàn)性范圍
(1)儀器和試劑：感量為0.1mg的分析天平，天平和砝碼應(yīng)經(jīng)過(guò)檢定，合乎要求。500ml容量瓶、25ml容量瓶，凡容量?jī)x器均應(yīng)經(jīng)過(guò)校正合格。
蒸餾水應(yīng)用玻璃磨口蒸餾器重蒸，貯于帶玻璃塞的瓶中。
0.02mol/L的H2SO4(A.R)，用上述蒸餾水配制，不必標(biāo)定，但應(yīng)一次配成1500ml以上，備用。
重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)試劑備用。
(2)溶液配制方法：精密稱(chēng)取在105℃干燥至恒重的重鉻酸鉀基準(zhǔn)試劑0.2g(稱(chēng)準(zhǔn)至0.1mg)，置500ml容量瓶中，用0.02mol/L的H2SO4液溶解，并稀釋至500ml，搖勻。
用滴定管精密量取上述重鉻酸鉀溶液1ml、2ml、3ml、…、10ml分別置于25ml容量瓶中，均用0.02mol/L的H2SO4稀釋至刻度，搖勻。
(3)測(cè)定方法：選好配對(duì)的1cm石英比色池，以0.02mol/L的H2SO4為空白，在波長(zhǎng)235nm處測(cè)定各試液的吸收值(當(dāng)吸收值大于1后，用×01檔)。
(4)計(jì)算方法：根據(jù)稱(chēng)樣及稀釋度，計(jì)算出各個(gè)的吸收系數(shù)，在直角坐標(biāo)紙上，以各吸收值為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸收系數(shù)為縱坐標(biāo)，繪出吸收系數(shù)-吸收值曲線(xiàn)。
一般來(lái)說(shuō)，儀器測(cè)出的吸收系數(shù)，在吸收值過(guò)小時(shí)，常偏高，過(guò)大時(shí)，常偏低，其間有一段坪區(qū)，在這區(qū)間測(cè)出的吸收值計(jì)算出的吸收系數(shù)是一個(gè)常數(shù)，它與平均值的偏差不超過(guò)±0.2％的一段，為這臺(tái)儀器的線(xiàn)性范圍或最佳工作范圍。
波長(zhǎng)(nm) 吸收系數(shù)(E1cm1%) 允許誤差
235 124.3 122.0~125.5
5.雜散光 用有玻璃接口的蒸餾器重蒸的蒸餾水和試劑規(guī)格的氯化鉀1.2g，配成100ml水溶液。以蒸餾水作為空白，用1cm吸收池在200nm波長(zhǎng)測(cè)定，透過(guò)率應(yīng)小于1.0％。
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