發(fā)出氨的試驗法
尿素酶可在室溫下,使脲迅速而完全地水解為氨及二氧化碳,因此尿素酶可在試驗專用儀器內(nèi),將試液一滴與10%脲的溶液一滴進行混和而作出檢定。儀器上的漏斗塞子,用一片曾經(jīng)錳-銀試劑溶液浸滲過的濾紙蓋住。如有尿素酶存在,在十分鐘或不到十分鐘,即有氨釋出,使濾紙變成黑色。
另一可替代的操作手續(xù),系將待試尿素酶的溶液一滴,放在滴試板的凹處,然后加入10%脲溶液一滴。5~10分鐘后,加入奈斯勒氏溶液一滴以驗証氨的產(chǎn)生。
應(yīng)注意到,小量的某些重金屬離子(Hg+2、Ag+)及Cu+2,會削弱相對大量尿素酶的活性,或大大地延長反應(yīng)時間。
使絡(luò)合結(jié)合縮二脲發(fā)生水解分裂的試驗法
尿素酶可以加速縮二脲的水解分裂:
NH(CONH2)2+H2O → 2CO2+3NH3 (1)
尿素酶的一個試驗法,即是根據(jù)于這一熟知的事實。這個水解作用,可用絡(luò)合堿-縮二脲鎳溶液的分解來說明。
當(dāng)縮二脲和鎳離子加堿金屬氫氧化物發(fā)生反應(yīng)時,所產(chǎn)生的黃色溶液,在加入二甲基乙肟時,并不產(chǎn)生紅色沉淀。這個鎳靈敏試驗法的隱蔽作用,是由于反應(yīng)(2)產(chǎn)生了酸式縮二脲的含鎳絡(luò)合陰離子之故。
反應(yīng)式(2)的平衡,是側(cè)重于向右進行的,致使鎳離子的濃度,不足以和二甲基乙二肟發(fā)生反應(yīng)??墒?,如加入尿素酶,使堿式縮二脲受到皂化,如(1)所示,這樣就可由于不衡(2)的恢復(fù),而釋出堿式縮二脲及Ni+2離子,使后者的濃度被提到二甲基乙二肟反應(yīng)可以發(fā)生的水平。
下面尿素酶的試驗法即根據(jù)于鎳的這個解蔽作用;此法具有適用于堿性溶液的優(yōu)點。大量的銨鹽引起二甲基乙二肟絡(luò)鎳從平衡溶液中沉淀出來。朊類及一切能收納-OH離子的物質(zhì),都產(chǎn)生同樣的效應(yīng)。
操作手續(xù) 將堿-鎳縮二脲試劑澄清溶液的液滴放在滴試板上毗鄰凹處,并將待試物的中性或堿性溶液一滴加到凹處之一,另一凹處則加水一滴。讓這混合物在室溫下放置10~15分鐘,然后將每一凹處都用1%二甲基乙二肟的酒精溶液一滴處理。如有尿素酶存在,那里就立即沉淀出紅色的二甲基乙二肟絡(luò)鎳??瞻自囼灥狞S色仍維持原狀,或發(fā)生趨向橙色的微弱變化。
試劑:硫酸鎳1克溶于50毫升水中,并加入縮二脲1克。溶液溫?zé)?,加?N氫氧化鈉15毫升。濾去生成的Ni(OH)2沉淀。長時間放置后,溶液變成混濁,過濾后仍可使用。