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甲烷單加氧酶調(diào)節(jié)蛋白MMOB的結(jié)...

調(diào)節(jié)蛋白B的分子量大約是16kDa,由7條β鏈構(gòu)成兩個β帶，這2個β 帶成直角，通過3個a螺旋，互相垂直交聯(lián)在一起，鄰接部分呈現(xiàn)螺旋趨勢，但較混亂。N端易受蛋白影響發(fā)生水解，N端水解后縮短了MMOB的鏈長度。基因重組的MMOB與天然MMOB相比，和MMOH結(jié)合的親和性有所降低。甲烷羥基化反應(yīng)的效率，取決于MMOH和MMOB在催化過程中的相互作用動力學(xué)。整個蛋白質(zhì)表面呈現(xiàn)疏水性，在酶系統(tǒng)反應(yīng)中只對MMOH一些關(guān)鍵部位的結(jié)構(gòu)和功能起調(diào)節(jié)作用，沒有直接參與酶的催化反應(yīng)。Walters等[42]利用NMR

甲烷單加氧酶的譜學(xué)表征

MMOH 結(jié)構(gòu)的譜學(xué)表征：一系列譜學(xué)研究表明，MMOH雙核鐵中心含有一個μ-氫氧橋(pr-hydr-oxo)結(jié)構(gòu)，容易發(fā)生誘導(dǎo)變形，在反應(yīng)循環(huán)過程中受其它組分影響，可以隨外部環(huán)境的變化而改變。聯(lián)合使用多種譜學(xué)手段對MMOH的結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行表征，有助于闡明MMO的反應(yīng)機(jī)理。根據(jù)文獻(xiàn)報道，在結(jié)構(gòu)化學(xué)中常用的各種現(xiàn)代光譜和波譜技術(shù)，都可以用來研究MMOH雙鐵核中心的構(gòu)型變化。它們包括ESR (electron spin resonace, 順磁共振)，Mossbauer, EXAFS(ex-tended

甲烷MMOH雙鐵核中心構(gòu)型

甲烷和分子氧的活化機(jī)理：為了闡明MMO可能的反應(yīng)機(jī)理，Rosenzweig 等對Bath菌的MMOH晶體分別在4C、- 160C進(jìn)行XFA表征。證明在一160°C時，雙核鐵中心由4個谷氨酸、2個組氨酸、1個乙酸基配位，但在4C時，乙酸配基則被水分子取代。因此在4C和一160C情況下，活性中心的構(gòu)型是不同的，如圖3-3所示。Shu等研究了OB3b的MMOH晶體活性中心結(jié)構(gòu)，得出了同樣的結(jié)果。

甲烷 羥基化酶的晶體結(jié)構(gòu)

為詳細(xì)了解甲烷單加氧酶的空間結(jié)構(gòu)信息，1993年，Lippard領(lǐng)導(dǎo)的科研小組首先在Nature上報道了M.capsulatusBath菌的羥基化酶晶體結(jié)構(gòu)，在學(xué)術(shù)界引起極大興趣。 羥基化酶經(jīng)過純化以后，他們對緩沖液、鹽濃度沉淀劑、溫度、pH、蛋白質(zhì)濃度等結(jié)晶參數(shù)進(jìn)行了1000 多次篩選，首次用真空擴(kuò)散法獲得了Bath菌的MMOH晶體，并進(jìn)行了X光單晶街射分析。

甲烷單加氧酶的總體構(gòu)型

甲烷單加氧酶( methane monooxygenases, EC1.14. 13.25)的分子量約301kDa,研究比較深入的是可溶性甲烷單加氧酶sMMO,它包含三個組分:羥基化酶(sMMOH, 220~ 250kDa)、還原酶(sMMOR, 38~ 41kDa)和調(diào)節(jié)蛋白B (sMMOB, 15~ 18kDa). sMMOH是由三個亞基組成的二聚體(aβr)2,每個單體有一個雙核鐵活性中心，位于羥基化酶的a亞基上，a亞基既含有a螺旋也含有β折疊，也是sMMO中唯一存在β折疊的亞基，活性中心的

什么是甲烷單加氧酶的結(jié)構(gòu)與反應(yīng)化...

單加氧酶泛指在結(jié)構(gòu)、生物化學(xué)和生物進(jìn)化上完全不同的一系列酶，這些酶能夠催化O2與不同的有機(jī)、無機(jī)底物發(fā)生反應(yīng)，在原核、真核微生物的分解代謝、消除環(huán)境污染物中發(fā)揮著重要作用。

甲烷單加氧酶中組分D-orfY的...

在第一個甲烷單加氧酶的基因序列測定中，就發(fā)現(xiàn)在整個基因序列申有一個小的開放閱讀框，編碼為orfY,但迄今尚未從甲烷氧化細(xì)菌中分離出該蛋白，對它的功能也不清楚。該基因位于mmoZ與mmoC之間，分子量約12kDa，稱為MMOD,如圖2-2所示。Merkx 對這個位于mmoZ與mmoC之間，功能未知的片斷orfY,在E.coli 中進(jìn)行了克隆表達(dá)，獲得了純的MMOD蛋白，通過WestenBolt分析，在Bath中確有MMOD存在。一個可能的解釋是該蛋白組裝在MMO雙鐵核中心內(nèi)，其功能是通過MMOD與MM

甲烷氧化菌的生物芯片研究

生物芯片可以用于細(xì)胞的檢測和微生物菌群結(jié)構(gòu)的高效分析。該技術(shù)是公認(rèn)的，迄今為止最簡便、快速、準(zhǔn)確的分子生物學(xué)方法。

甲烷單加氧酶的克隆與表達(dá)

在1994年和1996年，美國Jahng和Wood發(fā)表了以O(shè)B3b菌為背景的基因工程菌降解三氯乙烯和氯仿的研究結(jié)果，當(dāng)時由于構(gòu)建的基因工程菌活性極低，所以他們認(rèn)為該基因工程菌可能沒有活性。2002 年，Wood在Microbiol. Comm.上又發(fā)表文章指出，1994年和1996年發(fā)表的那兩篇論文，對基因工程菌活性的判斷可能有誤。他們認(rèn)為，第一個以菌株OB3b為背景構(gòu)建的Psudomonas Putida F1是有活性的，因為對TCE(三氯乙烯)的降解活性為5nmol/(min.mg)。而在19

甲烷單加氧酶的Cu離子調(diào)節(jié)表達(dá)

在細(xì)胞中，依據(jù)生長環(huán)境中可利用的CuP+濃度不同，甲燒單加氧酶有兩種不同表達(dá)形式。Cu2+濃度較高時，顆粒性甲烷單加氧酶得到表達(dá)。