用硫酸和棓酸的試驗(yàn)法
酒石酸鈣和含少許棓酸的硫酸一起加熱時(shí),產(chǎn)生藍(lán)色;如果僅有小量酒石酸鈣存在,卻為藍(lán)-綠到黃-綠色。濃硫酸會(huì)分裂酒石酸(Ⅰ)而產(chǎn)生乙醇醛(Ⅱ):
這個(gè)醛然后和棓酸C6H2(OH)3COOH形成有色的縮合產(chǎn)物,濃硫酸的作用,可能為脫水劑和氧化劑。
在同樣的情況下,乙醇酸、丙醇二酸、甘油酸及乙醛酸、以及甲醛與碳水化合物也都產(chǎn)生有色產(chǎn)物。草酸、檸檬酸、琥珀酸、乳酸、蘋果酸、肉桂酸、水楊酸及諸脂肪酸都不顯色。
操作手續(xù) 本試驗(yàn)法僅用很小量的鈣沉淀。應(yīng)先予過濾、洗滌,并在硬化濾紙上干燥之(防止纖維素纖維的干擾,因纖維素也有反應(yīng)),然后移入試管,用0.01%棓酸的濃硫酸溶液1毫升處理,并在自由火焰上加熱至120~150°。如果僅能獲得極小量的鈣沉淀,最好是用2N硫酸將它溶入過濾器上,而取其遺液一滴用于試驗(yàn)。
下列的顏色系由各種不同分量的酒石酸得到的:
100微克 藍(lán)色 | 10微克 藍(lán)-綠色 | 5微克 帶藍(lán)綠色 | 2微克 黃綠色 |
用β,β'-聯(lián)萘酚和硫酸的試驗(yàn)法
酒石酸如和含β,β'-聯(lián)萘酚的濃硫酸一起加熱,就有綠色螢光出現(xiàn)。
下列各酸和這試劑不起顯色反應(yīng):乳酸、蘋果酸、α-羥基丁酸、β-羥基丁酸、赤酮酸、丙酮酸、乙酰丙酸,草酸、糖質(zhì)酸、檸檬酸、水楊酸、間-羥基苯酸、對(duì)-羥基苯酸、原兒茶酸、棓酸、α-,β-,及γ-間-二羥基苯酸、焦棓酚羧酸、奎尼酸及肉桂酸;甲醛及碳水化合物也無(wú)反應(yīng)。
下列各酸產(chǎn)生不同的顏色:乙醇酸及乙醛酸(紅-棕色到棕色),甘油酸及中草酸(灰色),葡糖酸,葡糖醛酸,二羥基酒石酸、丙醇二酸及蘋果酸(綠色)。
操作手續(xù) 取固體試樣或其溶液一滴,用固體β,β'-聯(lián)萘酚少許或0.05%聯(lián)萘酚的濃硫酸溶液數(shù)毫升處理,并放85℃水浴中保持半小時(shí)。如有酒石酸存在,將有光度強(qiáng)弱不等的綠色螢光,在加熱時(shí)逐漸出現(xiàn),而在冷卻時(shí)加深。試劑本身的紫色螢光則逐漸消失。
如用試液一滴和試劑溶液1~2毫升一起加熱20至30分鐘,即少至10微克的酒石酸,也可檢定出來;0.05克的酒石酸,在有任何多少量的草酸或琥珀酸及1000倍于其量的檸檬酸或150倍于其量的肉桂酸,或10倍于其量的蘋果酸存在下,都可被檢定出來。
鑒定限度:10微克 酒石酸