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制備色譜法

抖化學(xué) / 2022-11-21

制備色譜法目的表明具有高樣品載荷容量的微粒硅膠可用于半制備規(guī)模的液相色譜分離。

設(shè)備 兩個(gè)恒流泵或恒壓泵; UV檢測(cè)器; RI檢測(cè)器(使用: Waters Associates ALC/GPC244 型液相色譜儀，包括有兩個(gè)M6000A型溶劑供輸系統(tǒng)和M660程序器; Waters Associ-ates 440型UV檢測(cè)器( 254纖米)，Waters Associates 示差折光計(jì))。

柱系統(tǒng) 三根300毫米×4毫米內(nèi)徑柱，填充以10微米Pora-sil。

注樣系統(tǒng) 樣品環(huán)管進(jìn)樣閥和注射器柱頭進(jìn)樣型式。使用Waters Associates U6K型無隔片注樣器。

流動(dòng)相 (1)氯仿;(2)異辛烷。

樣品四種增塑劑，即酞酸二甲酯、二乙酯、二正丁酯、二正辛酯。

輔助設(shè)備 樣品收集器。

操作步驟 四種增塑劑分離的最佳化，是使用低的樣品載荷量(<0.1亳克)，以分析規(guī)模得到最大的基線分辨率。這一分離是由“溶劑探索”技術(shù)完成的，使用了兩套M6000A溶劑供輸系統(tǒng)和溶劑程序器;其中一個(gè)泵供輸氯仿，另一個(gè)泵供輸異辛烷。對(duì)于所用柱系統(tǒng)的最佳溶劑組成是，20% 氯仿和180%異辛烷( V/V )。

對(duì)于制備操作，這一溶劑組成先在外部配制，然后用一個(gè)泵注人柱系統(tǒng)。柱的流出液由兩個(gè)串聯(lián)的檢測(cè)器( UV和RI檢測(cè)器)進(jìn)行監(jiān)控。連續(xù)增加注入的增塑劑樣品量，直到樣品載荷限度。對(duì)于所用的系統(tǒng)，這一樣品量約為四種組分共35毫克;超過這一水平，樣品就重疊，樣品在流動(dòng)相中的溶解度和在柱上的超載都起到限制作用。收集的樣品級(jí)分再行展開，以觀察所收集各峰的純度。

結(jié)果 圖13-50表示所達(dá)到的分析分離。參看下一個(gè)實(shí)驗(yàn)中樣品量對(duì)于分離的影響。對(duì)收集的樣品進(jìn)行分析，表明其純度至少為99%。

結(jié)論 這一實(shí)驗(yàn)表明，將幾根分析柱串聯(lián)，可以順利地進(jìn)行半制備規(guī)模的分離和收集。對(duì)于分析分離只需一根柱即已夠用，而將這些柱串聯(lián)起來，應(yīng)用常規(guī)分析技術(shù)進(jìn)行二到三次操作，就可收集到足夠的純樣品。

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