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       鈣在水溶液中以2價陽離子形式存在，其氫氧化物為強堿．許多含有羥基的有機試劑能與鈣生成穩(wěn)定的化合物，至今用于鈣的比色分析的較好的顯色劑是乙二醛－雙[2－（羥基縮苯胺）]（GBHA），這是一種具有很高靈敏度和選擇性的方法．此外，鈣色素亦是鈣的高選擇性試劑：

       鈣色素在pH2時與鈣離子形成紅色螯合物，在510毫微米處呈一最大吸收，此時的摩爾吸收系數(shù)為7．6×10³，且可在Sr²⁺和Ba²⁺占優(yōu)勢的樣品中測定較少量的鈣．

       GBHA法
       乙二醛－雙[2－（羥基縮苯胺）]與Ca²⁺在堿性溶液中生成難溶絡合物，反應為：

在1：1的水－甲醇溶液中上述絡合物逐漸溶解，這是因為與鈣離子相配位的兩分子水被甲醇分子替代的結果．試劑在甲醇溶液中呈無色，倘加入氫氧化鈉溶液則呈黃色，這可能是由于與羥基的離解作用的緣故．在實際工作中通常加入2毫升1N NaOH溶液（按最終體積為50毫升計算）而使溶液獲得最適宜堿度，對NaOH而言約為0．04N，即此時試劑與鈣離子的反應可進行完全，而此時試劑的顏色亦并不顯著，它們的吸收曲線如圖(Ⅷ-14)．

       這種紅紫色絡合物的最大吸收在516毫微米處，其摩爾吸收系數(shù)為1．8×10⁴．溶液經(jīng)10分鐘后方發(fā)色完全，以后便開始逐漸退色，半小時后約退去2－3％．除鈣外由于試劑亦能與許多兩價離子（如鍶、鋇）作用，此時可加入氰化物和硫化鈉作為掩蔽劑，再加入小量的硫酸鹽或碳酸鹽防止鍶和鋇離子的干擾．鎂及堿金屬離子不干擾鈣的測定，但碳酸鹽、氟化物、草酸鹽、酒石酸鹽及EDTA等不允許存在．

       試劑和溶液：
       1．乙二醛－雙[2－（鄰羥基縮苯胺）]  0．05％甲醇溶液，稱取50毫克試劑溶解在100毫升溶劑中即可．溶液可保存一星期；2．鈣標準溶液  稱取在110℃干燥恒重的CaCO₃固體2．4980克溶解在除盡CO₂的40毫升2N HCl中，移入1升容量瓶內，加水至刻度，此時濃度為每毫升含鈣1毫克，制作標準曲線時根據(jù)需要稀釋之；3．苛性鈉溶液  1N及5N溶液；4．偶氮－氧化偶氮BN  0．01％溶液，稱取該試劑10毫克溶解在100毫升四氯化碳中．使用前每10毫升該溶液中加1毫升磷酸三丁酯；5．四氯化碳；6．磷酸三丁酯．
       測定步驟：為了分離除去干擾離子，先在試液中加5N NaOH溶液至試液堿度約為0．5－1N（對NaOH而言），再用加有磷酸三丁酯的偶氮－氧化偶氮BN的四氯化碳溶液萃取振搖1分鐘，這時鈣進入有機相而干擾離子大都留在水相中．將有機相與水相分開后，在有機相中加入一定量的0．1N鹽酸再萃取鈣．此時的偶氮－氧化偶氮BN溶液保存起來下次又可再使用．

       取鈣含量不超過50微克而無銨鹽的分析試液一份（如有必要可加10毫克KCN和Na₂S作掩蔽劑），用氫氧化鈉或鹽酸中和至pH7－8，加20毫克硫酸鈉，25毫升乙二醛－雙[2－（鄰羥基縮苯胺）] 溶液，2毫升1N氫氧化鈉溶液，移入50毫升容量瓶中，加水至刻度，搖勻10分鐘后在516毫微米（或用黃綠色濾光片）處測定消光度．用空白液為比較液．