色譜柱的制備
同修 / 2022-07-13
色譜柱的制備
(1)色譜柱管的預處理 對不銹鋼柱管，截取所需長度的不銹鋼管，裝滿細砂，彎制成所需形狀(U形或螺旋形)。然后將砂倒出，用10%的熱堿液洗去管內(nèi)油污，用自來水洗干凈。再用10%的鹽酸溶液洗去管內(nèi)氧化物，至無殘渣，再用自來水，蒸餾水沖洗數(shù)次，最后用無水乙醇沖洗數(shù)次，吹干或烘干后待用。
對玻璃柱管可用洗液浸泡，然后用水洗至中性烘干即可。經(jīng)常使用的柱管在更換固定相時，倒出原裝填的固定相，用水沖凈后，用丙酮、乙醚有機溶劑沖洗2～3次，再用干燥氮氣吹干或烘干，即可重新再裝固定相。
（2）固體吸附劑或擔體的預處理將選用的固體吸附劑或擔體，經(jīng)分樣篩篩分，取較窄的目數(shù)范圍(如40～60目，
60～80目，80～100目)，用水漂洗除去粉末，烘干。對固體吸附劑就可準備裝柱，對擔體可準備涂漬固定液。
對固體吸附劑在使用一定時間后，吸附性能減弱，分離效率降低，要及時進行更換。對硅膠、分子篩，可用載氣將吸附的物質(zhì)驅(qū)逐掉，使之再生。再生溫度對硅膠約為150℃，對分子篩約為200～300℃。
(3)擔體的涂漬一根好的色譜柱不僅與選擇的固定液和擔體合適與否有關，并且與固定液能否在擔體表面上分布，呈一層均勻液膜，及固定相的填充情況有關。
為了在擔體表面得到一層薄而均勻的液膜，根據(jù)配比(通常為5～15%)需要先稱取一定量的固定液，再溶解在一適當?shù)挠袡C溶劑(能溶解固定液且不與固定液起化學反應，沸點低易揮發(fā)的)中，溶劑用量應能把擔體全部蓋住并有多余。固定液在有機溶劑中全部溶解后，加入一定量經(jīng)預處理的擔體，輕輕攪拌，用紅外燈照射(或用水浴)使溶劑揮發(fā)，溶劑全部揮發(fā)后即涂漬完畢。應注意，在涂漬過程中不可為求快用烘箱烘烤，若溶劑揮發(fā)過快，則固定液不易涂漬均勻，也不宜于用玻璃棒猛烈攪拌，以免損壞擔體。
對在溶劑中溶解較差的高沸點固定液，如氟橡膠、硬脂酸鹽類可用回流法，使固定液在溶劑中完全溶解后，再加入擔體，繼續(xù)回流1.5～2.0小時，然后取下讓溶劑揮發(fā)。
涂漬完畢后可在60～80℃烘箱中，將涂漬了固定液的擔體干燥，準備裝柱。
對固體吸附劑，若需涂漬去尾劑(0.1～1%)也可用上述方法進行。
（4）色譜柱的裝填將前面已處理好的色譜柱一端塞好玻璃毛并接真空泵，另一端接一漏斗，將固定相(固體吸附劑或已涂漬固定液的擔體)倒入漏斗中，邊抽氣，邊輕輕敲打(或用振蕩器機械振動)，使固定相均勻的裝緊在色譜柱管中，否則會影響分離效果。當裝填GDX固定相時，由于有靜電效應，高分子多孔小球易粘成小塊不好填充，此時可用少量丙酮潤濕紗布擦拭漏斗，使填充可順利進行。填滿后將柱接漏斗一端填充好玻璃毛，用帶絲扣螺帽安裝在色譜儀上。為獲得好的分離效果并提高柱效，應注意將色譜柱原接真空泵的一端與檢測器相接，而另一端接至汽化室。
(5)色譜柱的老化在色譜儀上安裝好欲使用的色譜柱，接通載氣試漏以后，就可升高柱溫進行老化。老化的目的，一是徹底除去殘余的溶劑和揮發(fā)性雜質(zhì)，再是促進固定液均勻地、牢固地分布在擔體表面上。老化的方法由固定液的性質(zhì)而定，老化時的柱溫應略高于操作時使用的柱溫，但不能超過固定液的最高使用溫度，用較低的載氣流速，讓載氣沖洗色譜柱，并烘烤老化幾到十幾小時。老化時，色譜柱連檢測器的一端可斷開，以防止檢測器被沾污。老化好的標志是接通記錄儀后，基線走的平直。至此準備色譜柱的工作結(jié)束了，可進行樣品分析了。
當使用混合固定液時，可用下述方法進行擔體的涂漬。
第一種是混合涂漬法，即將兩種固定液按一定比例混合溶解后涂漬在擔體上。
第二種是串聯(lián)法，即將兩種固定液分別涂漬在擔體上，并且分裝在兩根具有一定長度的色譜柱中，將兩根色譜柱串聯(lián)使用。
第三種是混合填料法，即將兩種不同的固定液分別涂漬在擔體上，再將兩種固定相按一定比例混合，裝入同一根色譜柱中。
從分離效果看，第一種和第二種接近，但以第三種方法最好。
當被分析的物質(zhì)組成復雜時，常使用混合固定液，它是由兩種性質(zhì)不同的以適當比例混合而成的固定液，此時可將固定液的極性、氫鍵結(jié)合能力或特殊作用性能調(diào)節(jié)到我們所要求的范圍內(nèi)，使其對給定混合物的分離既有比較滿意的選擇性，又不致使分析時間拖的過長。
例如，在分子中含有不飽和雙鍵的極性和氫鍵型固定液(如苯乙腈、乙二醇、甘油、四氫化萘等)中，加入一定量的硝酸銀，由于銀離子可與烯烴中不飽和鍵生成絡合物，與炔烴生成不揮發(fā)的乙炔化合物，因此可保留烯烴、炔烴、而烷烴就先流出。這種銀離子-不飽和鍵加合物在65℃以上迅速分解，因此不能在較高溫度下使用。當分離C4烴類時，常采用苯乙睛一AgNO3混合固定液，可完成正、異丁烯的分離任務。
另如，單純采用有機皂土能分離開鄰、間、對二甲苯的三種幾何異構體時，若同時存在乙苯，則對二甲苯會和乙苯重疊分不開，如改用6%有機皂土和6%鄰苯二甲酸二壬酯混合固定液，就能把乙苯，鄰、間、對二甲苯很好的分離。由于有機皂土是一種液晶，使用時柱溫應保持在50～150℃之間，若高于150℃液晶相被破壞，低于50℃時柱效率會下降。
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