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轉(zhuǎn)化成發(fā)螢光的鄰－羥基肉桂酸堿金屬鹽的試驗(yàn)法
       香豆素溶解于苛性堿時(shí)，其吡喃酮環(huán)分裂，而形成鄰－羥基肉桂酸的堿金屬鹽，或它們的陰離子：

       新配成的或在暗處儲(chǔ)藏過(guò)數(shù)月的堿性溶液在紫外光下都不顯示螢光?？墒侨鐚⑦@些溶液用紫外光照射后，數(shù)分鐘內(nèi)即現(xiàn)出黃-綠色的螢光，且其強(qiáng)度會(huì)增加到最大限度。（久曝于日光，也會(huì)發(fā)出螢光。）取新配成的香豆素堿性溶液一滴，放在濾紙上，用黑紙蓋住斑點(diǎn)的一半，然后用紫外光照射，這個(gè)光效應(yīng)就會(huì)有效地顯示出來(lái)。它的暴露部份，在1分鐘內(nèi)開(kāi)始發(fā)出螢光，且其強(qiáng)度一直增加。如在6～8分鐘后，將斑點(diǎn)的其余部份揭開(kāi)，強(qiáng)烈螢光的部份顯然與其它部分有別。如果以后再行照射，則斑點(diǎn)原來(lái)被蓋住部份也會(huì)開(kāi)始發(fā)出螢光，且暴露時(shí)間足夠后，整個(gè)面積現(xiàn)出均勻的螢光。
       似可合理地假定，香豆素溶于苛性堿時(shí)，其最初產(chǎn)物為不發(fā)螢光的順式鄰－羥基肉桂酸（a），經(jīng)過(guò)照射后，它就轉(zhuǎn)化成同分異構(gòu)而發(fā)螢光的反式（b）：

將（a）及（b）作一比較，也就是將苦馬酸（順－鄰－羥苯丙烯酸）的陰離子及香豆酸（反－鄰－羥苯丙烯酸）的陰離子作一比較，就可示出，只有按照（b）式中酚基內(nèi)H－原子的位置安放方式，才可使它對(duì)未飽和C－原子的螯合作用（6節(jié)環(huán)）不受COOH基團(tuán)的阻隔。這才有可能使螯形結(jié)合與螢光之間，建立起因果關(guān)系。

       這里所述的試驗(yàn)法，說(shuō)明了光效應(yīng)也可出現(xiàn)于苯環(huán)內(nèi)無(wú)自由OH基團(tuán)的香豆素衍生物的堿性溶液中。取代基似對(duì)螢光出現(xiàn)的速度有影響。例如，倘將佛手腦的堿性溶液一滴，置于濾紙上，并暴露于紫外光下，只有在暴露約10分鐘后才可辨認(rèn)出螢光開(kāi)始，而螢光強(qiáng)度的增加，比等克分子濃度的香豆素溶液遲緩得多。
       香豆素衍生物的苯環(huán)內(nèi)有自由OH基團(tuán)的〔如繖形酮（7－羥基香豆素）七葉亭（6，7二羥基香豆素）瑞香素（7，8－二羥基香豆素）等〕，在固態(tài)時(shí)或在堿性溶液中都有深藍(lán)色的螢光，是眾所周知的。這些化合物在堿性溶液中，并不發(fā)生光效應(yīng)。
       香豆素的堿性溶液紫外線照射之后而發(fā)出的螢光，如將溶液一滴暴露于濾紙上，即少至0．005微克的香豆素，也可辨認(rèn)得出。其相應(yīng)的稀釋限度為1：10000000。這種類型的試驗(yàn)對(duì)香豆素不是特效性的，因?yàn)樗牟缓u基衍生物也有同樣的性行，且因羥基香豆素有自發(fā)螢光，就使因照射而產(chǎn)生的螢光難以確定。
       如果將香豆素在室溫下或溫和地加熱時(shí)具有明顯的蒸氣壓這一事實(shí)加以利用，即可得到一種香豆素的特效試驗(yàn)法。這是將香豆素蒸氣和苛性堿接觸來(lái)形成（a），再用紫外光照射使轉(zhuǎn)化成發(fā)螢光的產(chǎn)物（b）。
       操作手續(xù)    在一微量試管中將待試物的醚溶液進(jìn)行蒸發(fā)，或取固體一小部份放入。試管的口蓋以曾經(jīng)1N苛性堿潤(rùn)濕過(guò)的濾紙一小片，并將管底置熱水中。數(shù)分鐘后，將紙置于石英燈下，短時(shí)內(nèi)將出現(xiàn)發(fā)黃-綠螢光的圓圈。
       鑒定限度：0．5微克  香豆素