影響分辨率的動力學和熱力學因素分辨率方程(2-5 )前兩項因子，本質是熱力學的;而塔板數(shù)N則主要與色譜的動力學特性有關。雖然調節(jié)熱力學變數(shù)可以改善分離程度，但也只能到-定限度為止。例如只需分離二或三個溶質時，通常可由調節(jié)流動相和固定相的組成即調節(jié)k'的值而得到改善。然而，如圖2-2的例子所示，這對于一個復雜的混合物，例如有10~20個組分全都需N要分離時，那就不可能解決了。這時往往只有增加N即改進柱的動力學特性才有可能改進分辨率。同樣，在增加色譜分析速度的同時而又能保持所需的N值，則僅能由改善動力學因素來完成。正是因為這一理由，近年來LC方面的主要努力旨在改善色譜的動力學因素而不是熱力學因素，因而，本章的目的在于，概括介紹如何由于我們加深了對色譜動力學的了解，而為柱的設計提供了實用規(guī)則。
在討論動力學特性之前，先考慮一個LC中現(xiàn)存的主要問題。分辨率方程(2-5)僅當所得到的是對稱的高斯峰和ω∞∠z時才是正確的。實際情況往往并非如此。高斯形峰的首要條件是k'對于任何溶質都不受濃度的影響;也即分配等溫線是直線(k'和分配等溫線之間的關系見45頁注2)。情況往往不是這樣，結果產(chǎn)生斜峰。非直線等溫線引起的歪斜，其最壞的后果是峰寬依z的高于0.5次方增加。于是， 預期隨距 離而改善的分辨率就不能實現(xiàn)，表觀塔板高度Hb∞p=ω2/16z隨遷移距離而增加。對稱峰形問題在LC中比在GC中更為嚴重，在下一發(fā)展階段將遇到的主要問題，無疑將是改善分配作用的熱力學。圖2-3表示人們經(jīng)常遇到的一類問題，它是四環(huán)素類在兩種改性硅膠上的分析，一種產(chǎn)生嚴重歪斜的峰，另一種產(chǎn)生接近對稱的峰形。改性的鍵合固定相使之得以改善。
如何能使-一個分配體系對于任何特定的一類化合物都產(chǎn)生線性的分配等溫線，是尚待解決的問題。僅能肯定的是，隨著溶質的極性增加，尤其是當溶質分子中極性官能團的數(shù)目增加時，由于熱力學效應引起的峰拖尾程度就更嚴重。拖尾程度也隨k'而增加。能夠電離的物質是這方面最難以對付的問題。
雖然如此，仍應選用高動力學性能的柱子，而且只要有可能，就應對一根新柱的動力學性能采用不產(chǎn)生熱力學拖尾的簡單參比化合物予以測量。使用測試混合物的例子見圖2-4。實踐中應該測量塔板數(shù)N,從而求出不保留的(k'=0)，輕度的，中等的和強烈保留(比如說k'值為0.2，1和4 )的溶質的塔板高度。洗脫色譜的塔板數(shù)和板高由方程(2-6)和(2-7)求出(見圖2-4):N=16(tR/ωt²)
L ωt
H=L/N=---------(----------)
16 tR
式中tR保留時間(從注樣瞬間測量得的洗脫時間)，ωt=峰底寬度，與tR單位相同，L是柱的長度。
以顆粒直徑的倍數(shù)表示塔板高度往往更有用:即h=H/dpo參數(shù)h叫做“換算塔板高度”。對于高效柱，h在2~3左右。如果一根柱子在實際操作條件下用標準混合物給出的h比10大很多，那末，或是柱子充填不良，或測試混合物不適于這種充填材料;或者柱充填材料的質量太差。通常顆粒直徑d,越大，在實際操作條件下的h就越高，其理由解釋于后。
引起峰不對稱或峰畸變的第二個原因是常常伴隨著管璧效應的柱充填不均勻。如后文所表明的，現(xiàn)代液相色譜柱中溶質帶的橫向擴散是相當緩慢的，高效柱中實際上不存在傳遞柱混合作用。因此，柱截面上的沈阻均勻性對于正常的柱性能極為重要。不均勻充填所引起的影響，早期液相色譜工作者均已熟知，即譜帶的館形化和呈指狀。在現(xiàn)代洗脫色譜圖中見到的特征則是由管壁效應引起的拖尾，有時則一個單一溶質給出二個或多 個峰。充填15微米以下的小顆粒的最適方法是淤漿技術。根據(jù)我們的經(jīng)驗，Bristow提出的方法11可用于硅膠或氧化鋁制成高質量的柱子，并有良好的重復性。這一方法可稱為稀的淤漿法。在甲醇中配制成重量比1~3%的填充物淤漿，以高壓灌入柱中。柱長250毫米以下者，壓力14兆牛頓/米“( 2000磅/英寸”)已足夠。
隨后灌入同樣體積的已烷或洗脫液。然后，關閉液流，先使壓力降至零才能取下柱子，如果需要時可擰上帽栓。曾用此法制備了有30000理論塔板的400毫米柱子。但更典型的是用5微米硅膠填充時可使100毫米柱子有8000塔板。即塔板高度是12.5微米,這就婷于2.5倍顆粒直徑。另方面也可使用體積含量30%的填充物的濃淤漿。淤漿可用丙酮或稠密的液體(例如，碘代甲燒+10%甲醇)制備，以避免充填物料的沉降。
大的顆粒例如20微米以上者，最好以旋轉、振動和敲擊的方法[2]干裝;即緩慢而連續(xù)地向柱子加入填充物，同時柱子以100轉/分旋轉，并以振幅數(shù)亳米的近似(但不相同)的頻率振動。面裝填一面在已充填部分上端輕輕敲擊。有一種機械能自動地完成這一操作，可獲最好的重復結果，而這樣的柱子也給出最低的h值2~3。這樣充填的柱子，帶角的顆粒與球形顆粒的性能之間差別一般很小，雖然有證據(jù)表明球形顆粒對流體的阻力較低;即具有低的P值(見下節(jié))。(柱充填技術見附錄II。)
.jpg "反應混合物中溴二苯乙烯在20微 米粒度的上的復雜色譜圖")
.jpg "在兩種鍵合填充材料上分析四環(huán)素類")
.jpg "一種芳香族試混合物在6微米硅膠上的色譜圖")
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