含有酚型－OH基團(tuán)而其鄰位尚為自由鄰位的化合物，可用亞硝酸使它轉(zhuǎn)化成鄰－亞硝基酚類。此亞硝酚類可因形成棕色的鈷（Ⅲ）螯形化合物來作出檢定。這里不必將亞硝化作用，與析出來亞硝基苯酚類和鈷鹽醋酸溶液的反應(yīng)分開進(jìn)行，完全可用酚類（固體或溶解的）開始，來和亞硝酸根絡(luò)高鈷酸鈉的醋酸溶液一起加熱，而直接產(chǎn)生有色的鈷螯形化合物。下列的幾個(gè)反應(yīng)階段是可以發(fā)生的：
反應(yīng)（3）的發(fā)生，顯然可使酚類的鄰位亞硝化作用特別容易。這可因下列事實(shí)的發(fā)現(xiàn)來表明，即苯酚和亞硝酸，原是幾乎無例外地會(huì)產(chǎn)生對(duì)－亞硝基苯酚的，但用亞硝酸根絡(luò)高鈷酸鹽的醋酸溶液作為亞硝化劑時(shí)，卻產(chǎn)生多量的鄰－亞硝基酚的鈷鹽。另一方面，酚分子內(nèi)所含的各種基團(tuán)，也對(duì)亞硝化作用有影響。例如，水楊酸或三種同分異構(gòu)的羥基苯（甲）醛，就都不能顯示（2）和（3）的反應(yīng)。
應(yīng)用此處所述的試驗(yàn)時(shí)，必須保証沒有芳族伯胺類存在。在操作手續(xù)所規(guī)定的條件下，這些胺類將以NH2基團(tuán)與一個(gè)OH基團(tuán)交換，因而必然現(xiàn)出酚反應(yīng)。不含親水基團(tuán)的胺類，可用醚萃取堿性溶液或懸浮液使之移去，而酚類則仍留在水層中，可對(duì)它直接進(jìn)行試驗(yàn)。
操作手續(xù) 這個(gè)試驗(yàn)可在微量試管中進(jìn)行。將試液一滴，或其固體少許，用亞硝酸根鈷酸鈉溶液及冰醋酸各一滴處理。同時(shí)在另一試管中，用一滴水作一空白試驗(yàn)。兩只試管一起在火焰上加熱，至空白試管中發(fā)現(xiàn)有粉紅色而止。如呈棕至黃色，或棕色沉淀，即示正反應(yīng)。如待檢定的酚內(nèi)不含親水基團(tuán)，則鈷螯形化合物將是不溶于水而是可溶于氯仿，或是可用氯仿萃取的。
試劑：新配制的5％亞硝酸根鈷酸鈉水溶液。
這個(gè)操作手續(xù)可檢出：
| 1微克 α－萘酚 | 5微克 鉻變酸 | 0.5微克 桑色素 |
| 5微克 1，4－萘酚磺酸 | 0.5微克 間苯二酚 | 0.5微克 2，4－二羥基苯（甲）醛 |
| 1微克 磺基水楊酸 | 2微克 鞣花酸 |
下列各物給出正反應(yīng)：焦棓酚、鄰－，間－，對(duì)－甲酚、?。ㄗ樱┫惴樱?－甲基－4－烯丙基苯酚）、氫醌、焦兒茶酚二磺酸、對(duì)－羥基聯(lián)苯、鄰－羥基聯(lián)苯、腎上腺素、棓酸、金蓮橙（苯間二酚－偶氮基對(duì)苯磺酸）、嗎啡、百里酚、熊果甙（對(duì)－苯二酚配葡糖）、2，4－二羥基苯（甲）醛、鄰－羥苯乙酮、醋酰胺胂（3－乙酰胺基－4－羥基苯胂酸）。水楊酸、水楊酸苯酯、間萘二酚。
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