氯仿、溴仿、碘仿或氯醛，和吡啶及苛性堿溶液溫熱片刻，即會產(chǎn)生紅色。其它多鹵化合物也觀察到有類似的顯色反應，并曾用于檢定及比色測定，只是至少有兩個鹵素原子結(jié)合著一個碳原子的鹵化合物，才有活性。其水溶紅色反應產(chǎn)物，可能是戊烯二醛的希夫氏堿類；它們的形成是由于多鹵化合物加成于環(huán)氮原子上后而打開了吡啶環(huán)。這個多鹵化合物如為氯仿，其反應可能為：
這個可以適用于其它多鹵化合物的反應方式，獲得了事實的支持：即醋酸加入于紅色的溶液，可使它變?yōu)辄S色，此后再加入芳族伯胺，如聯(lián)苯胺，可產(chǎn)生吡啶試驗所得戊烯二醛的紫色希夫氏堿沉淀。
現(xiàn)在已經(jīng)研究過的事例，還不足以允許對這個試驗法的選擇性有所論述?；旧峡梢灶A料，不僅多鹵化合物，而且含有活動性鹵原子的一鹵化合物，也能和吡啶有加成反應，且因而會隨即分裂來生成戊烯二醛的有色衍生物。
操作手續(xù) 用一微量試管，將試液一滴（不溶于水的化合物可用丙酮為溶劑），用吡啶兩滴與5N氫氧化鈉一滴處理。試管放入沸水中。按活性化合物存在量的多少，數(shù)秒或數(shù)分鐘內(nèi)將有紅色或粉紅色在吡啶層中出現(xiàn)。延長加熱，會使顏色消失或變?yōu)樽厣螯S色。如果加入聯(lián)苯胺鹽酸鹽少許，并用稀醋酸使混合物酸化，就可獲得紫色或沉淀。
下列各物量可被檢出：
| 1微克 氯仿 | 5微克 溴仿 |
| 50微克 碘仿 | 0.5微克 三氯醋酸 |
| 0.5微克 水合氯醛 | 2.5微克 四氯化碳（工業(yè)原料）① |
下列各物給出強烈反應：氯霉素、三氯乙烯、三溴乙醇。
下列各物無反應：六氯乙烷和滴滴涕〔雙－（對氯苯基）三氯乙烷〕。
① 晚近的研究工作指出，吡啶試驗的正反應系由于CCl4內(nèi)的沾污物，最大可能是CHCl3的沾污。小心精制過的CCl4并無反應。
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